玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发及应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115505648A(43)申请公布日2022.12.23(21)申请号202210760857.8A01H1/04(2006.01)(22)申请日2022.06.30(66)本国优先权数据202111473100.22021.12.02CN(71)申请人连云港市农业科学院地址222000江苏省连云港市海州区迎宾大道西(72)发明人王军柴文波许翰元李淑芬祝庆迟铭李洪涛(74)专利代理机构上海怡恩专利代理事务所(普通合伙)31336专利代理师牟俊玲(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)权利要求书2页说明书7页C12N15/11(2006.01)序列表1页附图1页(54)发明名称玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发及应用(57)摘要本发明公开了玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发及应用，属于生物技术领域。它包括检测待测玉米的基因型，根据待测玉米的基因型鉴定或辅助鉴定玉米耐旱；所述基因型为玉米基因组中KASP_RSP位点的基因型；所述KASP_RSP位点是玉米基因组中的一个SNP位点。本发明提供了一种玉米耐旱基因RSP41紧密连锁的KASP标记开发与应用，所述分子标记是与玉米耐旱基因RSP41紧密连锁的KASP标记KASP_RSP。该标记基于KASP技术开发，可高通量检测玉米基因组5号染色体的第73851206位碱基。本发明应用KASP技术对玉米耐旱基因RSP41进行基因型鉴定，具有操作简便、成本低廉、检测周期短、标记稳定、绿色环保等优点，可精准检测玉米耐旱基因RSP41，对促进玉米耐旱育种具有重要意义。CN115505648ACN115505648A权利要求书1/2页1.玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发方法，其特征在于：包括检测待测玉米的基因型，根据待测玉米的基因型鉴定或辅助鉴定玉米耐旱；所述基因型为玉米基因组中KASP_RSP位点的基因型；所述KASP_RSP位点是玉米基因组中的一个SNP位点，位于玉米5号染色体的第73851206位，所述SNP位点是核苷酸种类为C或者T，为SEQIDNo.4的第51位核苷酸；所述KASP_RSP位点的基因型为CC基因型的待测玉米为耐旱或者候选为耐旱玉米；所述KASP_RSP位点的基因型为TT基因型或者CT基因型的待测玉米为不耐旱或者候选为不耐旱玉米；其中，所述CC基因型表示玉米基因组中所述KASP_RSP位点的核苷酸种类为C的纯合型；所述TT基因型表示玉米基因组中所述KASP_RSP位点的核苷酸种类为T的纯合型；所述CT基因型表示玉米基因组中所述KASP_RSP位点的核苷酸种类为C和T的杂合型。2.根据权利要求1所述的玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发方法而提出的应用，其特征在于，所述应用包括以下几个方面：1）、所述KASP_RSP位点的多态性或基因型的物质在鉴定或辅助鉴定玉米耐旱中的应用；2）、所述KASP_RSP位点的多态性或基因型的物质在制备鉴定或辅助鉴定玉米耐旱的产品中的应用；3）、所述KASP_RSP位点的多态性或基因型的物质在玉米辅助育种或制备玉米辅助育种产品中的应用。3.根据权利要求1所述的玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发方法而提出的玉米育种方法，其特征在于，包括以下步骤：包括选择权利要求1中所述KASP_RSP位点的基因型为CC的玉米作为亲本进行育种，所述CC基因型表示玉米基因组中所述KASP_RSP位点的核苷酸种类为C的纯合型；所述玉米育种可为培育耐旱玉米。4.根据权利要求1所述的玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发方法而生产出的产品，其特征在于，主要包括以下几种产品，C1）检测与玉米耐旱相关的SNP多态性或基因型的产品；C2）鉴定或辅助鉴定玉米耐旱的产品；C3）用于玉米辅助育种的产品。5.根据权利要求2所述的玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发方法而提出的应用或权利要求4所述的玉米耐旱基因的KASP分子标记的开发方法而生产出的产品，其特征在于：所述KASP_RSP位点多态性或基因型的物质为如下D1）、D2）或D3）：D1）所述检测权利要求1中KASP_RSP位点的多态性或基因型的物质含有扩增包括所述KASP_RSP位点在内的玉米基因组DNA片段的PCR引物；D2）所述检测权利要求1中KASP_RSP位点的多态性或基因型的物质为含有所述PCR引物的PCR试剂；D3）含有D1）所述PCR引物或D2）所述PCR试剂的试剂盒。6.根据权利要求5所述的应用或产品，其特征在于：所述PCR引物为由核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.1的第22‑44位的单链DNA、核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.2的第22‑44位的单链DNA和核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.3的单链DNA组成的引物组。