一种茶树离体再生的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115589943A(43)申请公布日2023.01.13(21)申请号202210968459.5(22)申请日2022.08.12(71)申请人安徽农业大学地址230036安徽省合肥市蜀山区长江西路130号申请人中国科学院分子植物科学卓越创新中心(72)发明人韦朝领任露露朱木兰张照亮张有泽郑珂媛黄克林王静娴(74)专利代理机构北京知文通达知识产权代理事务所(普通合伙)16051专利代理师欧阳石文(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书8页附图5页(54)发明名称一种茶树离体再生的方法(57)摘要本发明属于植物组培领域，具体涉及茶树的离体再生的方法。以茶树茎段为起始外植体，建立了茶树茎段高效不定芽离体发生体系，以期为茶树的优质种苗规模化繁育、基因工程、基因编辑及种质资源保存等提供技术支持。CN115589943ACN115589943A权利要求书1/1页1.一种茶树离体再生的方法，其包括如下步骤：（1）外植体材料的制备：取带有茎节点的茎段作为外植体；（2）定芽诱导：将步骤（1）切好的茎段接种在定芽诱导培养基中，所述定芽诱导培养基基本培养基以MS培养基为基本培养基，添加1‑4mg/L6‑BA；（3）不定芽诱导与增殖：将步骤（2）中带定芽的茎段接种在不定芽诱导培养基中，所述不定芽诱导培养基的基本培养基为MS培养基，添加1‑3mg/L6‑BA、0.1‑0.3mg/LNAA、0.05‑0.15mg/LKT和0.5‑1.5mg/L脯氨酸；（4）不定芽伸长：将步骤（3）中诱导出的不定芽接种在不定芽伸长培养基中，所述不定芽伸长培养基的基本培养基为MS培养基，添加0.2‑1mg/L6‑BA和0.02‑0.1mg/LNAA；（5）不定根诱导：选取步骤（4）中生长健壮的伸长芽苗，单株接种到生根培养基中，基本培养基为1/2MS培养基，添加1‑4mg/LIBA。2.如权利要求1所述茶树离体再生的方法，其特征在于，进一步包括如下步骤：（6）炼苗：选取步骤（5）中长出发达根系的茶树苗，去掉封口膜，往培养瓶中加入少量的蒸馏水，置于室温下炼苗2‑4d后。3.如权利要求2所述茶树离体再生的方法，其特征在于，进一步包括如下步骤：（7）移栽：取出步骤（6）炼苗后的茶树苗洗干净根部的培养基，移栽至含有混合土塑料盆中，置于温室中生长。4.如权利要求1至3任一项所述茶树离体再生的方法，其特征在于，步骤（2）至（5）中的基本培养基添加蔗糖25‑35g/L，琼脂粉5‑9g/L，调节培养基pH值为5.8±0.1。5.如权利要求1至3任一项所述茶树离体再生的方法，其特征在于，步骤（2）至（5）的培养条件为光照强度1500‑2500lx，每天光照14‑18h，培养温度24±2℃。6.如权利要求5所述茶树离体再生的方法，其特征在于，步骤（1）中，具体操作是切取带部分叶片的当年所生半木质化茎段，茎段长0.5‑2cm，叶片切除远端，保留靠叶柄部位的叶片，以叶柄着生部位为茎段节点，上下端平切，切成带有一个茎节点的茎段外植体。7.如权利要求5所述茶树离体再生的方法，其特征在于，步骤（2）中，培养时长3‑5周，培养基中添加2‑3mg/L6‑BA。8.如权利要求5所述茶树离体再生的方法，其特征在于，步骤（3）中，培养时长3‑5周，培养基中添加2mg/L6‑BA、0.2mg/LNAA、0.1mg/LKT和1mg/L脯氨酸。9.如权利要求5所述茶树离体再生的方法，其特征在于，步骤（4）中，培养时长3‑5周，培养基中添加0.8mg/L6‑BA、0.08mg/LNAA。10.如权利要求3所述茶树离体再生的方法，其特征在于，步骤（7）中，所述混合土中营养土和珍珠岩体积比例为3:1。2CN115589943A说明书1/8页一种茶树离体再生的方法技术领域[0001]本发明属于植物组培领域，具体涉及茶树的离体再生的方法。背景技术[0002]茶树(Camelliasinensis(L.)O.Kuntze)是山茶科山茶属的多年生木本植物，为我国重要的经济作物，栽培历史悠久(陈宗懋.中国茶经[M].上海:上海文化出版社,1994:5)，茶叶为主要产品，茶饮品为世界三大无酒精饮料之一，市场需求量大。随着人们大健康意识的不断增强和生活水平的日益提高，茶树的遗传改良和优质种苗生产越来越受到重视。我国无性系茶苗生产主要以短穗扦插繁育为主，其次为压条繁殖。短穗扦插能够很好地保持品种原有的优良特性，但存在育苗周期长、繁殖系数低、受季节限制等缺陷；压条繁殖方式操作简单、根系发达，但在茶树种苗规模化生产繁育上局限性很大。较传统无性繁殖方法而言，植物离体再生技术具有培养周期短、增殖率高、种苗生产不受时间与地域限制、培养条件人为可控、