菜豆普通花叶病毒分离物及其全长cDNA侵染性克隆构建方法和应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115725516A(43)申请公布日2023.03.03(21)申请号202211487634.5C12N15/82(2006.01)(22)申请日2022.11.24C12N1/21(2006.01)A01H5/00(2018.01)(83)生物保藏信息A01H6/82(2006.01)CCTCCNO:V2022882022.11.23C12Q1/70(2018.01)(71)申请人江苏省农业科学院C12R1/01(2006.01)地址210014江苏省南京市玄武区钟灵街C12R1/94(2006.01)50号(72)发明人崔晓艳项美朱宇翔王琼吴冕陈新(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204专利代理师王艳(51)Int.Cl.C12N7/00(2006.01)权利要求书1页说明书8页C12N15/40(2006.01)序列表（电子公布）附图5页(54)发明名称菜豆普通花叶病毒分离物及其全长cDNA侵染性克隆构建方法和应用(57)摘要本发明公开了一种菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03及其全长cDNA侵染性克隆构建和应用，所述菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03于2022年11月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：V202288。本发明首次发现了能够侵染烟草的菜豆普通花叶病毒，打破了菜豆普通花叶病毒抗病研究方面的物种界限，将相关研究拓展到烟草上。本发明还进行了该病毒的全长cDNA侵染性克隆的重组载体的构建及其应用。本发明选择能够侵染烟草的菜豆普通花叶病毒株系构建侵染性克隆载体，转化农杆菌并注射烟草后，成功的在烟草上形成了系统侵染。CN115725516ACN115725516A权利要求书1/1页1.一种菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03，其特征在于，所述菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03于2022年11月23日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：V202288。2.权利要求1所述的菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03的全长cDNA，其特征在于，所述菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03的全长cDNA序列如SEQIDNO:1所示。3.表达盒、重组载体或重组菌株，其特征在于，其包含权利要求2所述的菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03的全长cDNA。4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于，所述重组载体为敲除载体、敲减载体或过表达载体。5.权利要求4所述的重组菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求2所述的菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03的全长cDNA与线性化载体相连得到重组载体，将重组载体导入宿主细胞中获得重组菌株，重组菌株验证后获得的阳性菌落即为重组菌株。6.权利要求4所述的重组载体的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括权利要求5所述的重组菌株的构建方法，还包括将阳性菌落提取质粒即得重组载体。7.权利要求1所述的菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03、权利要求2所述的全长cDNA、权利要求3所述的重组载体或重组菌株、或含有权利要求2所述的全长cDNA的侵染植物组织或全长cDNA侵染的植株、或所述的全长cDNA侵染植株的可再生细胞产生的组织培养物或原生质体在植物抗菜豆普通花叶病毒中的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述抗菜豆普通花叶病毒中的应用包括在植物中导入权利要求1所述的菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03或权利要求2所述的全长cDNA；和/或敲除权利要求2所述的菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03的全长cDNA。9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，扩增菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03的全长cDNA的引物为扩增菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03的全长cDNA编码区的引物；优选地，所述扩增病毒RD03的全长cDNA编码区的引物序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。10.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，检测菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03的引物为检测菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD03的CP基因编码区的引物；优选地，所述检测菜豆普通花叶病毒分离物BCMV‑RD033的CP基因的引物序列如SEQIDNO.5和SEQIDNO.6所示。2CN115725516A说明书1/8页菜豆普通花叶病毒分离物及其全长cDNA侵染性克隆构建方法和应用技术领域[0001]本发明属于植物病毒技术领域，具体涉及菜豆普通花叶病毒分离物及其全长cDNA侵染性克隆构建方法和应用。背景技术[0002]菜豆普通花叶病毒(Beancommonmosaicvirus，BCMV)属于马铃薯Y病毒科(Potyv