一种柑橘转基因芽快速成苗的方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115812452A(43)申请公布日2023.03.21(21)申请号202211207699.XA01G2/38(2018.01)(22)申请日2022.09.30A01G13/04(2006.01)A01G9/16(2006.01)(71)申请人四川农业大学地址625000四川省雅安市雨城区新康路46号申请人四川博浩宇农业科技有限公司四川天府新区乡村振兴研究院(72)发明人王小蓉柴久凤谢锐何文罗亮王燕陈清王浩吴志伟杨绍凤(74)专利代理机构成都行之智信知识产权代理有限公司51256专利代理师李林(51)Int.Cl.A01G2/30(2018.01)权利要求书1页说明书5页附图1页(54)发明名称一种柑橘转基因芽快速成苗的方法(57)摘要本发明公开了一种柑橘转基因芽快速成苗的方法，包括如下步骤：以柑橘实生苗为砧木，取转基因芽嫁接至柑橘实生苗；采用不透水的软质嫁接夹夹持并紧固嫁接部位；将透明管竖直罩在嫁接苗外部，然后再设置保湿罩，保持保湿罩内适宜温度与湿度。本发明采用软质嫁接夹紧固嫁接部位，操作步骤简单且不易导致嫩芽脱落，从而提高转基因芽的成活率。此外，采用透明管和保湿罩进行双重保湿，有利于转基因芽在适宜的温度和湿度下进行培育，进一步提高育苗的成活率。本发明公开的育苗方法不需要在无菌的环境中进行，即在常规环境中即可实现育苗，操作简单，育苗周期短，育苗成本低，嫁接成活率高，对以柑橘产业优质高效可持续发展为目标、以定向遗传改良为方向的柑橘基因工程育种和分子设计育种意义重大。CN115812452ACN115812452A权利要求书1/1页1.一种柑橘转基因芽快速成苗的方法，其特征在于，包括如下步骤：1)以柑橘实生苗为砧木，取转基因芽嫁接至柑橘实生苗；2)采用不透水的软质嫁接夹夹持并紧固嫁接部位；3)将透明管竖直罩在嫁接苗外部，然后再设置保湿罩，保持保湿罩内适宜温度与湿度。2.根据权利要求1所述的柑橘转基因芽快速成苗的方法，其特征在于，所述软质嫁接夹采用不透水材质制成，且所述软质嫁接夹上具有开口。3.根据权利要求1所述的柑橘转基因芽快速成苗的方法，其特征在于，所述保湿罩上开设有通气孔。4.根据权利要求1‑3任一项所述的柑橘转基因芽快速成苗的方法，其特征在于，所述砧木为生长了2～3个月、半木质化且直立健壮的‘蒲江香橙’实生苗。5.根据权利要求4所述的柑橘转基因芽快速成苗的方法，其特征在于，所述‘蒲江香橙’实生苗由其种子在20～28℃，光/暗周期16h/8h条件下置于基质中培养得到。6.根据权利要求5所述的柑橘转基因芽快速成苗的方法，其特征在于，所述基质由营养土、蛭石以及珍珠岩按照体积比2～4:1:1混合而成。7.根据权利要求1所述的柑橘转基因芽快速成苗的方法，其特征在于，所述柑橘转基因芽的叶片数量大于2且具有茎结构。8.根据权利要求1所述的柑橘转基因芽快速成苗的方法，其特征在于，所述接穗的底部呈“V”字形。9.根据权利要求1所述的柑橘转基因芽快速成苗的方法，其特征在于，所述透明管的长度高于所述嫁接苗的高度5～8cm且其直径大于所述嫁接苗的最宽宽度1～3cm。10.根据权利要求1所述的柑橘转基因芽快速成苗的方法，其特征在于，所述砧木的嫁接口距离土表面的高度为3～6cm。2CN115812452A说明书1/5页一种柑橘转基因芽快速成苗的方法技术领域[0001]本发明涉及育苗技术领域，具体涉及一种柑橘转基因芽快速成苗的方法。背景技术[0002]柑橘既是世界第一大水果，也是我国第一大水果。应用优良砧木品种对柑橘产业高效优质可持续发展至关重要。‘蒲江香橙’(Citrusjunoscv.‘PujiangXiangcheng’)是近年从野生柑橘资源香橙(Citrusjunos)中发掘的优新柑橘砧木品种(川审果2016017)，用作柑橘砧木，根系发达，嫁接亲和性好，接穗品种早结，丰产，稳产，果实品质优良，遗传性状稳定，并且抗寒，抗涝，耐碱性土壤等。但是目前‘蒲江香橙’并没涉及转基因芽的嫁接育苗。[0003]目前，已报道的柑橘遗传转化体系主要存在转基因芽生根困难、移栽成活率低、难以快速成苗等问题，一定程度上限制了柑橘基因工程育种进程。虽然试管微芽嫁接技术能解决柑橘转基因芽生根率和移栽成活率低的问题，但是传统微芽嫁接通常在无菌环境进行培养，且为了便于无菌操作需切除砧木的一部分根部，而砧木自身恢复生长及移栽入土需要一定时间。因此，该方法技术不仅对材料培养条件要求高，且难以快速获得转基因植株。目前虽然也有研究在室外进行嫁接成苗，但通常采用绑缚膜或者套管固定砧穗，绑缚固定时操作繁琐，并不适用微芽嫁接部位的包覆与固定，而采用套管固定则存在嫩芽易脱落等缺点。[0004]因此，目前迫切需要一种周期短