含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的质粒及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115838760A(43)申请公布日2023.03.24(21)申请号202211555449.5A01H6/20(2018.01)(22)申请日2022.12.06A01H5/00(2018.01)C12N15/82(2006.01)(71)申请人浙江农林大学C12R1/01(2006.01)地址311300浙江省杭州市临安区武肃街666号浙江农林大学(72)发明人李春芳陶玉宋洒洒冉卫西高珑瀚曹清海黄素亚刘宁鸽(74)专利代理机构杭州天正专利事务所有限公司33201专利代理师黄美娟黄竞云(51)Int.Cl.C12N15/84(2006.01)C12N1/21(2006.01)C07K14/415(2006.01)C12N15/29(2006.01)权利要求书1页说明书12页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的质粒及其应用(57)摘要本发明公开了一种含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的质粒及其应用，本发明的茶树NAC转录因子CsNAC002基因的表达与植物的黄酮醇含量相关，在茶树中沉默该基因可显著降低茶树的黄酮醇含量；在植株如拟南芥中过量表达CsNAC002基因可以显著提高黄酮醇的含量。CN115838760ACN115838760A权利要求书1/1页1.一种含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的表达质粒，其特征在于所述表达质粒按如下方法制备：将茶树NAC转录因子CsNAC002基因插入含有35S启动子的表达载体得到。2.如权利要求1所述的含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的表达质粒，其特征在于：所述茶树NAC转录因子CsNAC002基因编码SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。3.如权利要求1或2所述的含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的表达质粒，其特征在于：所述茶树NAC转录因子CsNAC002基因的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示。4.如权利要求1所述的含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的表达质粒，其特征在于：所述35S启动子的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示。5.如权利要求1所述的含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的表达质粒，其特征在于：所述表达载体为pCAMBIA2300。6.如权利要求1所述的含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的表达质粒转化农杆菌制备的转基因农杆菌。7.如权利要求6所述的转基因农杆菌制备的过表达黄酮醇的转基因植株。8.如权利要求7所述的转基因植株，其特征在于：所述转基因植株的宿主为拟南芥。9.如权利要求7所述的转基因植株，其特征在于：所述转基因植株按如下方法制备：(1)培养步骤(1)所述的转基因农杆菌至菌液的OD600为0.6，得到重组基因工程菌的菌液；将植株花序浸泡于所述重组基因工程菌的菌液中进行浸染，培养，收种，得到种子；(2)步骤(1)所述的种子干燥后，培养至成株，取叶片进行凝胶电泳验证，即得到所述过表达黄酮醇的转基因植株。10.如权利要求9所述的转基因植株，其特征在于：所述转基因植株按如下方法制备：1)将所述的茶树NAC转录因子CsNAC002基因插入到含有35S启动子的表达载体后，得到含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的表达质粒，将所述表达质粒转化农杆菌感受态细胞，获得用于侵染拟南芥的转基因农杆菌；2)培养步骤(1)所述的转基因农杆菌至菌液的OD600为0.6，得到重组基因工程菌的菌液；将拟南芥花序浸泡于所述重组基因工程菌的菌液中1min进行浸染，取出放入暗箱中，覆膜保湿，暗培养一天；在28℃的培养温度下按照光照16hr/d，黑暗8hr/d进行培养，5‑7天后再浸染一次，在28℃的培养温度下按照光照16hr/d，黑暗8hr/d进行培养，收种，得到拟南芥种子；3)步骤(2)所述的拟南芥种子干燥后，播种于培养基中，在28℃的培养温度下按照光照16hr/d，黑暗8hr/d进行培养，待长出绿色嫩芽后，挪至土壤中，在28℃的培养温度下按照光照16hr/d，黑暗8hr/d进行培养；所得植株通过提取叶子DNA，凝胶电泳验证后，即得到所述过表达黄酮醇的转基因植株。2CN115838760A说明书1/12页含茶树NAC转录因子CsNAC002基因的质粒及其应用技术领域[0001]本发明涉及植物基因工程领域，具体涉及一种含茶树NAC转录因子CsNAC002的质粒及其在调控黄酮醇类化合物代谢中的应用。背景技术[0002]茶是世界上最受欢迎的非酒精饮料之一。我国是世界上最早种茶、制茶、饮茶的国家，茶作为饮品在我国已有几千年的历史。大量的研究表明每日饮茶对人体健康有益，喝茶可以降低癌症发病率(Hertog等,1993；Soobrattee等,2010)减