一种氯霉素降解菌、氯霉素脱氢酶、编码基因及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115851525A(43)申请公布日2023.03.28(21)申请号202211458047.3C12N9/02(2006.01)(22)申请日2022.11.16C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)(83)生物保藏信息G01N30/02(2006.01)CCTCCNO：M202215152022.09.27G01N30/06(2006.01)(71)申请人安徽农业大学G01N30/30(2006.01)地址230036安徽省合肥市长江西路130号G01N30/32(2006.01)安徽农业大学G01N30/34(2006.01)(72)发明人吴祥为高永生黄俊伟潘丹丹B09C1/10(2006.01)方连城花日茂C02F3/34(2006.01)C12R1/01(2006.01)(74)专利代理机构广州市华学知识产权代理有C12R1/19(2006.01)限公司44245C02F101/38(2006.01)专利代理师高宁馨(51)Int.Cl.C12N1/20(2006.01)权利要求书1页说明书8页C12N15/53(2006.01)序列表（电子公布）附图6页(54)发明名称一种氯霉素降解菌、氯霉素脱氢酶、编码基因及其应用(57)摘要生物工程技术、应用于污染环境微生物修复技术领域，涉及一种高效去除氯霉素的菌株、氯霉素脱氢酶、编码基因及其应用。本发明从污水处理厂的活性污泥中分离获得了一种高效降解氯霉素的菌株Sphingobiumsp.WTD‑1，保藏编号为CCTCCNO：M20221515，还采用比较转录组学分析克隆和制备得到了该菌株中能够降解氯霉素的氯霉素脱氢酶，能够120min内完全降解30mg/L的氯霉素，本发明获得氯霉素降解菌和氯霉素脱氢酶可用于去除环境中氯霉素污染，具有非常重要的理论价值和应用前景。CN115851525ACN115851525A权利要求书1/1页1.一种降解氯霉素的菌株，其特征在于，所述菌株为Sphingobiumsp.WTD‑1，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2022年09月27日，保藏编号CCTCCNO：M20221515。2.一种氯霉素脱氢酶基因，其特征在于，所述氯霉素脱氢酶基因核苷酸序列如SEQIDN0.1所示。3.一种氯霉素脱氢酶，其特征在于，所述氯霉素脱氢酶的氨基酸序列如SEQIDN0.2所示。4.一种载体，其特征在于，所述载体中含有如SEQIDN0.1所示基因序列。5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体中含有如SEQIDN0.1所示基因序列。6.一种基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌中含有如权利要求5所述的表达载体。7.根据权利要求4或权利要求5所述的载体在制备氯霉素脱氢酶中的应用。8.根据权利要求1所述的菌株、根据权利要求3所述的氯霉素脱氢酶在降解氯霉素中的应用。9.根据权利要求1所述的菌株、根据权利要求3所述的氯霉素脱氢酶在制备降解氯霉素的制剂中的应用。10.一种氯霉素降解产物的检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）应用权利要求1所述的菌株、权利要求3所述的氯霉素脱氢酶或权利要求9所述的制剂对样品中的氯霉素进行降解；（2）取降解后的部分样品，在其中加入等体积的甲醇，振荡混匀后，12000rpm/min离心2min，样品用0.22μm尼龙滤膜过滤，利用HPLC进行检测；HPLC色谱条件为：AgilentZORBAXStableBondPhenyl，4.6x250mm,5µm，SN/LN：USUU019677/B09145，流动相为乙腈：0.5%磷酸水溶液=28:72（v/v），流速为1mL/min；检测波长为278nm；柱温为35℃，进样量为20μL。2CN115851525A说明书1/8页一种氯霉素降解菌、氯霉素脱氢酶、编码基因及其应用技术领域[0001]本发明属于生物工程技术、应用于污染环境微生物修复技术领域，涉及一种高效去除氯霉素的菌株、氯霉素脱氢酶、编码基因及其应用。背景技术[0002]抗生素是世界范围内使用率和消费量较高的一类药物活性化合物，也是一种能干扰其他细胞生长、发育的化学物质。目前全球有250多种人类或动物使用的抗生素，全球抗生素年消费量高达10‑20万吨，其中我国是抗生素的主要生产国和消费国。由于抗生素的广泛使用甚至滥用，且大部分抗生素(10%‑90%)在被人类和牲畜使用后（或以代谢物的形式）通过粪便和尿液排出，导致其在全球各地水体、沉积物和土壤中被频繁检出，对人类身体健康和生态系统安全造成潜在的不利影响。因而，近年来抗生素作为最重要的新兴环境污染物群体之一，已受到了科学界和公众的广泛关注。[0003]氯霉素(D‑苏式‑(‑)‑N‑[