抗小麦条锈病的普通小麦-纤毛鹅观草易位系及选育方法、分子标记和用途.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927710A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202210948379.3(22)申请日2022.08.09(71)申请人南京农业大学地址210095江苏省南京市玄武区卫岗1号(72)发明人王秀娥王彤李星悦王海燕肖进袁春霞孙丽王宗宽(74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204专利代理师冒艳(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/6841(2018.01)权利要求书1页说明书6页序列表3页附图3页(54)发明名称抗小麦条锈病的普通小麦-纤毛鹅观草易位系及选育方法、分子标记和用途(57)摘要本发明公开了抗小麦条锈病的普通小麦‑纤毛鹅观草易位系及选育方法、分子标记和用途。本发明利用60Co‑γ辐射处理普通小麦‑纤毛鹅观草二体异附加系DA2Sc的去雄植株，授南农0686花粉，对其后代种子根尖细胞有丝分裂中期染色体进行GISH/FISH分析，并进行条锈病鉴定，创制了高抗条锈病的小麦‑纤毛鹅观草小片段易位系，并筛选获得可特异性追踪该抗病片段的IT标记。以本方法所选育的易位系对条锈病高抗，该易位区段为小麦条锈病遗传改良提供了新的抗病基因源。CN115927710ACN115927710A权利要求书1/1页1.一种抗小麦条锈病的普通小麦‑纤毛鹅观草易位系，其特征在于：易位染色体为纤毛鹅观草2Sc长臂顶端片段与普通小麦4B染色体的部分片段发生的顶端易位。2.权利要求书1所述的抗小麦条锈病的普通小麦‑纤毛鹅观草易位系的选育方法，其特征在于：包含以下步骤：(1)普通小麦‑纤毛鹅观草2Sc二体异附加系开花前去雄，用60Co‑γ进行雌配子辐射；(2)辐射后的植株，取普通小麦品种南农0686的新鲜成熟花粉进行授粉，获得M1代种子；(3)将所述M1代种子浸泡发根，待种子根长至1.5‑2cm时，分单株剪取根尖用于荧光原位杂交，进行细胞学鉴定，鉴定出含有普通小麦‑纤毛鹅观草易位染色体的植株；分单株提取cM1代植株基因组DNA，选择2S特异分子标记进行PCR检测，选择能检测出特异条带且有纤毛鹅观草基因组荧光信号的植株进行自交，单株收获，即M2种子；(4)将M2代种子自交，选择鉴定方法同步骤(3)，单株收获M3种子；(5)将M3代种子发芽，取根尖进行细胞学制片，选择细胞学制片进行荧光原位杂交GISH/FISH；结合2Sc特异分子标记鉴定结果和条锈病抗性鉴定结果，筛选出纯合的抗小麦条锈病的普通小麦‑纤毛鹅观草易位系T4BS·4BL‑2ScL。3.根据权利要求2所述的抗小麦条锈病的普通小麦‑纤毛鹅观草易位系的选育方法，其特征在于：追踪所述的抗小麦条锈病的普通小麦‑纤毛鹅观草易位系T4BS·4BL‑2ScL的特异分子标记，所用引物序列如下：4.根据权利要求2所述的抗小麦条锈病的普通小麦‑纤毛鹅观草易位系的选育方法，其特征在于：辐射剂量1200rad，剂量率为100rad/min。5.根据权利要求2所述的抗小麦条锈病的普通小麦‑纤毛鹅观草易位系的选育方法，其特征在于：对T4BS·4BL‑2ScL的分子细胞学鉴定方法为：使用纤毛鹅观草基因组DNA探针，小麦D组专化探针Oligo‑pAs1和小麦B组专化探针Oligo‑pSc119.2，并标记上不同的荧光信号，纤毛鹅观草基因组DNA用Fluorescein‑12‑dUTP标记为绿色，Oligo‑pSc119.2和Oligo‑pAs1用TAMRA(6‑carboxytetramethylrhodamine)标记为红色，进行原位杂交。6.权利要求2所述的抗小麦条锈病的普通小麦‑纤毛鹅观草易位系在抗小麦条锈病中的用途。2CN115927710A说明书1/6页抗小麦条锈病的普通小麦‑纤毛鹅观草易位系及选育方法、分子标记和用途技术领域[0001]本发明涉及小麦遗传育种技术、分子标记和用途，特别涉及小麦‑纤毛鹅观草抗小麦条锈病易位系的选育及用于鉴定该易位系的分子标记。背景技术[0002]小麦条锈病是由小麦条形柄锈菌(Pucciniasriiformisf.sp.tritici，Pst)引起的危害小麦生产的世界性真菌病害。全世界80％以上的小麦易受条锈菌的感染，每年可造成高达547万吨的产量损失(Beddowetal.，2015)。2009年出现的新毒性小种CYR34迅速成为流行小种，现有品种逐渐丧失抗性。将小麦野生近缘物种中的抗病外源基因导入小麦，是提高小麦抗病性的重要途径之一。目前为止，已正式命名的83个抗条锈病基因中，来源于小麦近缘植物的抗条锈病基因有18个，占被正式命名基因的20.7％。小麦抗条锈病品种的选育和新的抗源挖掘一直是小麦育种中的重点。[0003]鹅观草属(RoegneriaC.Ko