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(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115927296A(43)申请公布日2023.04.07(21)申请号202211110172.5(22)申请日2022.09.13(71)申请人海南省农业科学院蔬菜研究所地址571100海南省海口市琼山区兴丹路14号(72)发明人庞强强孙晓东周曼王亚强蔡兴来(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205专利代理师林德强(51)Int.Cl.C12N15/11(2006.01)C12Q1/6895(2018.01)C12Q1/686(2018.01)权利要求书2页说明书11页序列表(电子公布)(54)发明名称菜心高温胁迫内参基因及其筛选方法和应用(57)摘要本发明属于农业生物技术领域,公开了菜心高温胁迫内参基因及其筛选方法和应用,具体公开了菜心高温胁迫内参基因。本发明首次根据菜心高温胁迫转录组数据,筛选出16个在高温胁迫条件下,菜心基因表达谱中稳定表达的基因作为菜心高温胁迫内参基因,为今后发掘菜心耐热相关基因以及其功能的研究提供了有效的稳定内参基因,有利于提高菜心胁迫下基因表达分析研究的稳定性和可靠性,丰富了菜心高温胁迫有关基因表达研究中关于内参基因使用的种类,为基因表达检测的准确分析奠定良好基础,具有较好的应用价值。CN115927296ACN115927296A权利要求书1/2页1.菜心高温胁迫内参基因,其特征在于,所述内参基因包括亲环蛋白CYP基因、转录延伸因子EF1基因、肌动蛋白Actin基因、核糖体蛋白28sRPS27基因、β微管蛋白TUB基因、核糖体蛋白40sRPS17基因、酪蛋白激酶CKⅠ基因、硫氧还蛋白TRX基因、核糖体蛋白60sRPL18基因、核糖体蛋白50sRPL15基因、泛素连接酶UBI基因、呼吸爆发氧化酶NADPH基因、2,4‑二烯酰基辅酶A还原酶DECR1基因、F‑box基因、过氧化物酶体蛋白PMP基因和c30129.graph_c0基因中的至少一种。2.根据权利要求1所述的内参基因,其特征在于,所述亲环蛋白CYP基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示;所述转录延伸因子EF1基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示;所述肌动蛋白Actin基因的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示;所述核糖体蛋白28sRPS27基因的核苷酸序列如SEQIDNO:4所示;所述β微管蛋白TUB基因的核苷酸序列如SEQIDNO:5所示;所述核糖体蛋白40sRPS17基因的核苷酸序列如SEQIDNO:6所示;所述酪蛋白激酶CKⅠ基因的核苷酸序列如SEQIDNO:7所示;所述硫氧还蛋白TRX基因的核苷酸序列如SEQIDNO:8所示;所述核糖体蛋白60sRPL18基因的核苷酸序列如SEQIDNO:9所示;所述核糖体蛋白50sRPL15基因的核苷酸序列如SEQIDNO:10所示;所述泛素连接酶UBI基因的核苷酸序列如SEQIDNO:11所示;所述呼吸爆发氧化酶NADPH基因的核苷酸序列如SEQIDNO:12所示;所述2,4‑二烯酰基辅酶A还原酶DECR1基因的核苷酸序列如SEQIDNO:13所示;所述F‑box基因的核苷酸序列如SEQIDNO:14所示;所述过氧化物酶体蛋白PMP基因的核苷酸序列如SEQIDNO:15所示;所述c30129.graph_c0基因的核苷酸序列如SEQIDNO:16所示。3.用于扩增权利要求1或2所述内参基因的引物。4.根据权利要求3所述的引物,其特征在于,所述扩增亲环蛋白CYP基因的引物序列如SEQIDNO:17和SEQIDNO:18所示;所述扩增转录延伸因子EF1基因的引物序列如SEQIDNO:19和SEQIDNO:20所示;所述扩增肌动蛋白Actin基因的引物序列如SEQIDNO:21和SEQIDNO:22所示;所述扩增核糖体蛋白28sRPS27基因的引物序列如SEQIDNO:23和SEQIDNO:24所示;所述扩增β微管蛋白TUB基因的引物序列如SEQIDNO:25和SEQIDNO:26所示;所述扩增核糖体蛋白40sRPS17基因的引物序列如SEQIDNO:27和SEQIDNO:28所示;所述扩增酪蛋白激酶CKⅠ基因的引物序列如SEQIDNO:29和SEQIDNO:30所示;所述扩增硫氧还蛋白TRX基因的引物序列如SEQIDNO:31和SEQIDNO:32所示;所述扩增核糖体蛋白60sRPL18基因的引物序列如SEQIDNO:33和SEQIDNO:34所示;所述扩增核糖体蛋白50sRPL15基因的引物序列如SEQIDNO:35和SEQIDNO:36所示;所述扩增泛素连接酶UBI基因的引物序列如SEQIDNO:37和SEQIDNO:38所示;所述扩增呼吸爆发氧化酶NADPH基因的引物序列如SEQIDNO:39和SEQID