一种抗H7亚型禽流感病毒的纳米抗体及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115947833A(43)申请公布日2023.04.11(21)申请号202211108871.6G01N33/569(2006.01)(22)申请日2022.09.09G01N33/68(2006.01)C12R1/84(2006.01)(71)申请人华南农业大学地址510630广东省广州市天河区华南农业大学兽医学院(72)发明人董心迎冯赛祥李伟业刘珮琪曹雪薇黄秀琴罗开健(74)专利代理机构广州嘉权专利商标事务所有限公司44205专利代理师姜磊(51)Int.Cl.C07K16/10(2006.01)C12N15/13(2006.01)C12N15/81(2006.01)C12N1/19(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表（电子公布）附图4页(54)发明名称一种抗H7亚型禽流感病毒的纳米抗体及其应用(57)摘要本发明属于生物技术领域，公开了一种抗H7亚型禽流感病毒的纳米抗体及其应用。该抗H7亚型禽流感病毒的纳米抗体选自纳米抗体Q74或纳米抗体L125b；所述纳米抗体L125b中3个CDR区的氨基酸序列分别如SEQIDNO：6‑8所示；所述纳米抗体Q74中3个CDR区的氨基酸序列分别如SEQIDNO：10‑12所示。所述纳米抗体具有良好的稳定性和生物学活性，可应用于H7亚型禽流感病毒的诊断和检测，并具备优异的检测灵敏度和准确性。CN115947833ACN115947833A权利要求书1/1页1.一种抗H7亚型禽流感病毒的纳米抗体，其特征在于，选自纳米抗体Q74或纳米抗体L125b；所述纳米抗体L125b中3个CDR区的氨基酸序列分别如SEQIDNO：6‑8所示；所述纳米抗体Q74中3个CDR区的氨基酸序列分别如SEQIDNO：10‑12所示。2.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体L125b的氨基酸序列如SEQIDNO：5所示。3.根据权利要求1所述的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体Q74的氨基酸序列如SEQIDNO：9所示。4.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1‑3中任一项所述的抗H7亚型禽流感病毒的纳米抗体。5.根据权利要求4所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQIDNO：13或SEQIDNO：14所示。6.一种重组表达载体，其特征在于，包含权利要求4‑5中任一项所述的核酸分子。7.一种重组菌，其特征在于，包含权利要求4‑5中任一项所述的核酸分子或权利要求6所述的重组表达载体。8.根据权利要求7所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌为重组酵母菌。9.权利要求1‑3中任一项所述的纳米抗体在制备H7亚型禽流感病毒诊断/检测试剂盒中的应用。10.一种H7亚型禽流感病毒诊断/检测试剂盒，其特征在于，包含权利要求1‑3中任一项所述的纳米抗体。2CN115947833A说明书1/8页一种抗H7亚型禽流感病毒的纳米抗体及其应用技术领域[0001]本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗H7亚型禽流感病毒的纳米抗体及其应用。背景技术[0002]流感病毒是一种单股、负链、有囊膜、分节段的RNA病毒，属于正黏病毒科流感病毒属，其基因组包含分段的8股负链核糖核酸。流感病毒的核蛋白与基质蛋白，即NP与M1，根据二者的抗原性将流感病毒分为甲、乙、丙、丁四个亚型。禽流感病毒属于其中的甲型，其抗原性由表位上的HA和NA结构决定，而这两者经常发生变异，导致禽流感产生多种分型，其中影响最广泛和危害最大的是H5亚型、H7亚型以及H9亚型。[0003]对于禽流感防控，关键在于感染早期做出诊断。鉴定AIV的传统方法有细胞培养以及鸡胚培养，通过MDCK传代分离培养H7亚型AIV，然后利用显微观察病变情况可做出判断。血清学以及生物工程的发展促进了禽流感诊断领域的发展。H7亚型禽流感病毒在大多数诊断中的初步诊断结果与其他亚型的禽流感病毒相类似，所以通常需要通过诊断确诊禽流感病毒，再通过分子学实验进行验证。对于禽流感的主流诊断方法包括病原检测、流感血清检测以及分子生物学的检测。[0004]禽流感病毒的所有亚型中危害较大的是H5、H7以及H9三种亚型，其中关于H7亚型禽流感相关的研究以及抗体筛选较少。在目前的诊断检测领域，纳米抗体体现了它可观的发展前景以及巨大的应用价值。原因是由于纳米抗体具有以下优点：[0005]1、水溶性好：纳米抗体因为FR2区域上的疏水性氨基酸数量占该段氨基酸的比例较小而亲水性分子物质较大，从而使得纳米抗体在理化性质上具有更好的溶解性。如果将纳米抗体制成药物，高溶解性能够提高药物的利用率。[0006]2、耐热性强：纳米抗体结构上存在的二硫键大大增强了纳米抗体的耐热能力，在37℃下经过1周时间，生物活性最少可只降