针对H7亚型禽流感病毒的纳米抗体M124及其应用.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN115873104A(43)申请公布日2023.03.31(21)申请号202210952258.6G01N33/569(2006.01)(22)申请日2022.08.09G01N33/543(2006.01)G01N33/68(2006.01)(71)申请人华南农业大学C12R1/84(2006.01)地址510640广东省广州市天河区五山路483号(72)发明人董心迎罗开健刘珮琪黄秀琴曹雪薇冯赛祥(74)专利代理机构佛山市君创知识产权代理事务所(普通合伙)44675专利代理师张燕玲(51)Int.Cl.C07K16/10(2006.01)C12N15/13(2006.01)C12N15/81(2006.01)C12N1/19(2006.01)权利要求书1页说明书9页序列表（电子公布）附图3页(54)发明名称针对H7亚型禽流感病毒的纳米抗体M124及其应用(57)摘要本发明涉及针对H7亚型禽流感病毒的纳米抗体M124及其应用，属于分子生物学领域，本发明利用酵母双杂交技术成功筛选出针对H7亚型禽流感病毒的纳米抗体，构建真核表达系统，并验证所筛选出的纳米抗体对H7亚型禽流感病毒的结合能力，为该病毒的中和抗体的研究及快速诊断方法的开发提供技术支持和抗体材料。CN115873104ACN115873104A权利要求书1/1页1.一种针对H7亚型禽流感病毒的纳米抗体M124，其特征在于：所述纳米抗体M124的氨基酸序列如SEQIDNO：02所示。2.一种编码权利要求1所述纳米抗体M124的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO：01所示。3.一种重组表达载体，所述重组表达载体包含编码权利要求1所述纳米抗体M124的基因。4.一种转化体，其特征在于：所述转化体是将权利要求3所述重组表达载体转化宿主细胞所得。5.权利要求1所述的纳米抗体M124在制备检测H7亚型禽流感病毒药物中的应用。6.一种检测H7亚型禽流感病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含权利要求1所述的纳米抗体M124。2CN115873104A说明书1/9页针对H7亚型禽流感病毒的纳米抗体M124及其应用技术领域[0001]本发明属于分子生物学领域，具体涉及针对H7亚型禽流感病毒的纳米抗体M124及其应用。背景技术[0002]禽流感病毒属于正黏病毒科，分为A、B、C、D四种不同型的流感病毒。其中A型流感病毒变异最快，根据流感病毒的表面糖蛋白血凝素和神经氨酸酶抗原不同，将A型流感病毒HA分为18种亚型(H1～H18)，NA分为11种亚型(N1～N11)。而不同的HA和NA理论上可形成18×11种亚型病毒。禽流感病毒可以感染野鸟和家禽，H7亚型首次在意大利传播并流行，随后在德国、巴基斯坦、美国、澳大利亚等地相继爆发H7亚型禽流感疫情，导致数百万只鸡死亡，给家禽养殖业造成了重大的经济损失。虽然目前还没有发现人传人的病例，但禽流感H7亚型已经严重威胁了人类健康与社会公共卫生安全。[0003]近年来，为减少疫病的传播，抗体发挥着重要的作用。抗体的发展经历了多克隆抗体、单克隆抗体，到目前的基因工程抗体三个阶段。单克隆抗体克服了多克隆抗体特异性低，均一性差的缺点；基因工程抗体是在单克隆抗体基础上，利用基因工程手段对抗体进行改造和修饰，通过构建嵌合抗体、小分子抗体、人源化抗体、多特异性抗体等，以改善抗体效力和功能。[0004]纳米抗体也称为VHH抗体，最早被Hamers‑Casterman等人发现，是存在于骆驼科动物内的天然缺乏轻链特殊类型的抗体，后来又在羊驼、大羊驼和鲨鱼等动物也发现了纳米抗体。由于纳米抗体只有常规抗体的单个N‑末端结构，因此其重链分子量低于常规分子量。纳米抗体之所以能受到广泛的关注，是由于它具有以下优点：(1)分子量小，约15ku，仅为常规IgG抗体1/10；(2)稳定性强，水溶性高，不易聚集，且能在细胞内发挥作用；(3)亲和力高，纳米抗体与抗原结合的亲和力可达nM，甚至pM级；(4)能耐受极端理化环境，如在90℃高温或胃蛋白酶存在下仍具有活性；(5)可识别半抗原、隐蔽表位，甚至酶的凹槽部等常规抗体不能识别的位点；(6)易于制备，可在多种原核细胞、真核中表达，表达量高，成本低廉；(7)组织穿透性强，能穿过实体瘤和血脑屏障；(8)比常规的抗体更易于进行工程化改造。[0005]在动物疫病上，可以通过噬菌体展示技术、酵母杂交和细菌展示技术筛选多种病原的纳米抗体，推动动物疫病防控技术的发展。[0006]其中，酵母双杂交技术是检测蛋白质与蛋白质之间相互作用的首选方法，利用该方法从cDNA文库中寻找与已知蛋白相互作用的未知蛋白。酵母细胞中的Gal4结构具有两个不同的功能域：N端的DAN结合域(BD)和C端的激活域(