一株猪圆环病毒2型毒株及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102732486A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102732486A(43)申请公布日2012.10.17(21)申请号201210139084.8(22)申请日2012.05.08(83)生物保藏信息CGMCCNo.57742012.02.08(71)申请人山东省农业科学院畜牧兽医研究所地址250100山东省济南历城区桑园路10号(72)发明人李俊王金宝时建立徐绍建吴家强(51)Int.Cl.C12N7/00(2006.01)A61K39/12(2006.01)A61P31/20(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书权利要求书1页1页说明书说明书44页页附图附图11页(54)发明名称一株猪圆环病毒2型毒株及其应用(57)摘要本发明通过分离鉴定得到了一株猪圆环病毒2型毒株(PCV2)，并命名为PCV2SD株，毒株保减号为CGMCCNO.5774。PCV2SD毒株具有较高滴5.0度，在盲传4代后毒价为10TCID50/mL，传代至第6.020代病毒毒价为10TCID50/mL，该毒株的分离鉴定为下一步深入开展PCV2相关研究及控制提供了一定的基础。CN10273486ACN102732486A权利要求书1/1页1.一种猪圆环病毒2型毒株PCV2SD，其特征在于：其保藏编号为：CGMCCNO.5774。2.权利要求1所述的猪圆环病毒2型毒株PCV2SD在制备治疗猪圆环病毒2感染的药物中的应用。3.权利要求2所述的应用，其特征在于所述药物为疫苗。4.权利要求4所述的猪圆环病毒2型毒株PCV2SD在治疗猪圆环病毒2感染的动物中的应用。2CN102732486A说明书1/4页一株猪圆环病毒2型毒株及其应用技术领域[0001]本发明属于微生物动物疫苗领域，尤其涉及一株猪圆环病毒2型毒株及其相关应用。背景技术[0002]猪圆环病毒为无囊膜单股环状DNA病毒，病毒粒子直径为17-20nm，呈20面体对称。在国际病毒学分类中，已将猪圆环病毒、鸡贫血病毒及鹦鹉喙羽病毒分为一个新科，即圆环病毒科。该病毒现有两个基因型PCV1和PCV2，基因组含有2个主要阅读框架，其中ORF1基因编码产物与病毒复制酶相关(Rep)，ORF2基因编码产物是构成病毒衣壳蛋白(Cap)成分。PCV1是由Tischer等1974年首次在PK-15细胞培养物中发现，对猪无致病性。猪圆环病毒2型(porcinecircovirustype2，PCV2)可引起断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾病综合征(PDNS)、繁殖障碍等相关疾病，其中以PMWS最为严重，PMWS于1991年首次在加拿大发现，其病原为PCV2感染引起。该病主要侵害6～12周龄仔猪，引起渐进性消瘦、呼吸困难、腹泻和黄疽等，给世界养猪业造成了巨大的经济损失。[0003]国内自2001年报道该病以来，在各省市均有不同程度的流行。为此本研究在对临床样品进行PCV2检测的基础上，将检测为阳性的病例进行了病毒分离，由于PCV2体外培养不产生细胞病变，病毒增殖能力差，给研究工作带来一定困难。为了深入研究PCV2在体外细胞培养增殖的特性，本研究从临床PMWS病料分离PCV2毒株，经细胞连续传代，获得一株细胞培育适应毒，经聚合酶链式反应(PCR)、间接免疫荧光实验、透射电镜及核酸序列分析等方法鉴定、证实分离株为PCV2。为下一步深入开展PCV2相关研究提供了一定的物质材料与理论基础。附图说明[0004]图1PCV2SD病毒PCR扩增产物：1.DNA标准DL2000；2-5病毒培养物PCR产物；6阳性对照7.阴性对照[0005]图2IFA法检测PCV2SD感染PK-15细胞结果：图A为感染细胞，图B为未感染细胞对照。[0006]图3电镜下观察到的PCV2SD粒子照片：(140,000×)标尺＝50nm。发明内容[0007]本发明通过分离鉴定得到了一株猪圆环病毒2型毒株(PCV2)，并命名为PCV2SD株，该毒株已于2012年2月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区屯路，中国科学院微生物研究所)，毒株保藏号：CGMCCNO.5774，其分类命名为：猪圆环病毒2型。[0008]PCV2的检测通常需要借助免疫荧光实验等方法，应用病毒特异性抗体才能证实病毒在细胞中复制。本研究采用IFA法检测病毒感染细胞中的抗原。荧光显微镜下观察，3CN102732486A说明书2/4页PCV2单克隆抗体孔可见致密的细胞核内荧光染色及稀疏的胞浆内荧光染色。PCV2在体外细胞培养不呈现细胞病变，病毒在细胞的增殖能力也较差。可能与该病毒复制的过程中过度依赖宿主细胞聚合酶有关，由于这种酶类主要在细胞繁殖S周期中合成，缩短了病毒的繁殖