杜仲药材的多成分含量测定方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106124639A(43)申请公布日2016.11.16(21)申请号201610195762.0(22)申请日2016.03.31(71)申请人贵州医科大学地址550004贵州省贵阳市北京路9号贵州医科大学(72)发明人黄勇王爱民李勇军王永林郑林孙佳陆苑廖尚高杨畅(74)专利代理机构贵阳中新专利商标事务所52100代理人刘楠李余江(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图1页(54)发明名称杜仲药材的多成分含量测定方法(57)摘要本发明公开了一种杜仲药材的多成分含量测定方法，用于同时测定杜仲药材中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷的含量，它采用UPLC法，以WatersBETC18（2.1×150mm，1.7µm）为色谱柱，0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液进行梯度洗脱，检测波长为205nm，流速0.25mL/min，柱温45℃。按照本发明的方法，杜仲中的六种有效成分能得到较好的分离，方法的加样回收率为96.92%～101.01%，RSD﹤3%。该方法可为杜仲的质量控制研究提供依据。CN106124639ACN106124639A权利要求书1/1页1.杜仲药材的多成分含量测定方法，用于同时测定杜仲药材中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷的含量，其特征在于：采用UPLC法，以WatersBETC18（2.1×150mm，1.7µm）为色谱柱，0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液进行梯度洗脱，检测波长为205nm，流速0.25mL/min，柱温45℃。2.根据权利要求1所述的杜仲药材的多成分含量测定方法，其特征在于：用甲醇作为杜仲药材的提取溶剂，提取回流次数为2次。2CN106124639A说明书1/7页杜仲药材的多成分含量测定方法技术领域[0001]本发明属于中药检测技术领域，尤其是涉及杜仲药材的多成分含量测定方法。背景技术[0002]杜仲为杜仲科植物杜仲EucommiaulmoidesOliv.的干燥树皮，又名思仙、思仲、木棉，为我国名贵滋补药材。杜仲作为中药在我国已有2000多年的药用历史，具有补肝肾、强筋骨、降血压、抗肿瘤、安胎等诸多功效，《神农本草经》将其列为上品。[0003]目前已知杜仲的主要化学成分有木质素类、环烯醚萜类、苯丙素类、黄酮类等几十种化合物，研究表明其中部分活性成分桃叶珊瑚苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷、绿原酸、京尼平苷酸、京尼平苷具有抗肿瘤、降血压、抗菌、抗血栓等药理作用。《中国药典》2010版中收录用高效液相法测定松脂醇二葡萄糖苷单一成分，但并未给出杜仲中其它成分含量的测定方法，现行质量标准含量测定指标单一，难以全面的评价杜仲药材的内在质量。发明内容[0004]本发明的目的是以UPLC作为分析手段建立多指标定量分析方法，在同一色谱条件下同时对杜仲药材中的桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷6个有效成分进行含量测定，从而较为全面的覆盖药材中所含的木质素类、环烯醚萜类及酚酸类成分，克服药材质量控制的片面性，进一步提高了杜仲药材的质量控制研究、为杜仲药材的开发应用提供实验依据。[0005]本发明的技术方案如下：本发明的杜仲药材的多成分含量测定方法，用于测定杜仲药材中桃叶珊瑚苷、京尼平苷酸、绿原酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷的含量，采用UPLC法，以WatersBETC18（2.1×150mm，1.7µm）为色谱柱，0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液进行梯度洗脱，检测波长为205nm，流速0.25mL/min，柱温45℃。[0006]用甲醇作为杜仲药材的提取溶剂，提取回流次数为2次。[0007]具体的，包括如下步骤：步骤1：制备对照品溶液和供试品溶液；对照品溶液的制备方法是：分别精密称取桃叶珊瑚苷、绿原酸、京尼平苷酸、京尼平苷、松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷对照品适量至6个5mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度。获得桃叶珊瑚苷（1.169mg/mL）、京尼平苷酸（1.205mg/mL）、绿原酸（1.253mg/mL）、京尼平苷（1.000mg/mL）、松脂醇二葡萄糖苷（1.190mg/mL）、松脂醇单葡萄糖苷（1.100mg/mL）的储备液。分别精密量取上述6种对照品储备液置同一个10mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得混合对照品溶液（0.2221、0.1808、0.0376、0.1000、0.0595、0.0088mg/mL），于4℃保存备用。[0008]供试品溶液的制备方法是：精密称取粉碎的杜仲药材2g，精密加