多菌种固态发酵生产杜仲叶生物饲料添加剂的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106509339A(43)申请公布日2017.03.22(21)申请号201611005985.2C12N1/14(2006.01)(22)申请日2016.11.16C12R1/125(2006.01)C12R1/685(2006.01)(71)申请人山西大禹生物工程股份有限公司C12R1/46(2006.01)地址044600山西省运城市芮城县永乐南路开发区(72)发明人胡红伟闫凌鹏段明房麻啸涛邹吉祥杨京娥党亚朋(74)专利代理机构太原科卫专利事务所(普通合伙)14100代理人朱源武建云(51)Int.Cl.A23K10/12(2016.01)A23K10/18(2016.01)A23K10/30(2016.01)C12N1/20(2006.01)权利要求书2页说明书8页(54)发明名称多菌种固态发酵生产杜仲叶生物饲料添加剂的方法(57)摘要杜仲叶直接饲喂动物口感较差，长时间饲喂有可能造成畜禽等养殖动物采食量下降，杜仲叶各种有效成分由于细胞壁的包裹，在动物体内吸收较差。通过微生物发酵的方式可明显改善杜仲叶的口感，有效释放各种生物活性成分，提高其营养价值。本发明涉及一种多菌种固态发酵生产杜仲叶生物饲料添加剂的方法，通过菌种制备、固态发酵、低温干燥三大步骤制备得到发酵杜仲叶最终产品，既改善了杜仲叶的口感，发酵的同时又产生了益生菌及其代谢产物。发酵后产品各组成成分为：总菌数≥5.0×108CFU/g，总黄酮≥1.5%，绿原酸≥0.4%，乳酸≥2%。CN106509339ACN106509339A权利要求书1/2页1.一种多菌种固态发酵生产杜仲叶生物饲料添加剂的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）、原料采集：采摘杜仲鲜叶；（2）、杀青：采用沸腾干燥，控制叶片含水量在12%以下，冷却至室温；（3）、原料的粉碎：将杜仲叶、豆粕、玉米、麸皮进行粉碎；（4）、发酵菌种的制备：取枯草芽孢杆菌、黑曲霉和粪肠球菌冻干粉，经活化、逐级扩培制备菌种；（5）、固态发酵：a、混合：将杜仲叶、豆粕粉、玉米粉按比例混合，高压蒸汽灭菌，待物料冷却至38~40℃后，黑曲霉加入到上述混合料中，混合均匀，然后将枯草芽孢杆菌菌液加入到纯水中混匀，再与上述物料混匀，纯水添加量为物料干重的40~50%，然后将最终混合料送入发酵室；b、好氧阶段：将混合好的物料转运到发酵室，发酵室温度控制在25~30℃，每天翻堆一次，控制发酵室相对湿度70~80%，发酵5~7d；c、厌氧阶段：好氧发酵结束后，将发酵饲料打散，将粪肠球菌接入物料中，然后装入单向阀发酵袋中，发酵室温度控制在25~30℃，进行厌氧发酵，发酵时间24~36h；（6）、低温烘干：将发酵好的物料转入沸腾干燥车间，控制沸腾干燥温度40~45℃，待物料水分达5~10%时，即可。2.根据权利要求1所述的多菌种固态发酵生产杜仲叶生物饲料添加剂的方法，其特征在于：步骤（2）中，沸腾干燥条件为，温度控制70~80℃，烘干时间20~30min。3.根据权利要求1所述的多菌种固态发酵生产杜仲叶生物饲料添加剂的方法，其特征在于：步骤（5）中，步骤a，发酵物料的混合组分比例为，杜仲叶80~85%，玉米粉5~10%，豆粕5~10%；发酵物料的灭菌条件为，温度121~123℃，时间20~30min。4.根据权利要求3所述的多菌种固态发酵生产杜仲叶生物饲料添加剂的方法，其特征在于：按发酵物料质量比例接种，黑曲霉接种量3~8%，枯草芽孢杆菌菌液3~8%，粪肠球菌菌液5~10%。5.根据权利要求1所述的多菌种固态发酵生产杜仲叶生物饲料添加剂的方法，其特征在于：步骤（4）中，黑曲霉菌种制备方法如下：菌种的活化：取黑曲霉冻干粉，接入黑曲霉液体试管中，25~30℃、160~220r/min，振荡培养48h；茄子瓶菌种制备：取试管菌种1mL加入到500mL茄子瓶斜面培养基中，涂布均匀，25~30℃静置培养48~72h；固体扩培：取杜仲叶30~50%，麸皮30~50%，豆粕粉20~30%，加入0.3~0.5%的氯化钠和纯水混匀，料水比控制在1:0.35~0.5，挤压无水滴为宜，然后灭菌，冷却至35℃以下时，将茄子瓶孢子用无菌水冲洗，接入上述物料中，放入浅盘中，覆盖一层保鲜膜，发酵温度25~30℃，培养时间48~72h，每隔24h翻料通气，发酵好后，置于通风干燥处风干，密封保存，即得黑曲霉生产种子。6.根据权利要求5所述的多菌种固态发酵生产杜仲叶生物饲料添加剂的方法，其特征在于：黑曲霉活化及斜面培养基组成成分包括：马铃薯200g/L，杜仲叶粉20g/L，葡萄糖20g/L，琼脂20g/L。2CN106509339A权利要求书2/2页7.根据权利要求1所述的多菌种固态发酵生产杜仲叶生物