杜梨抗寒转录因子PbrMYB5及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108484742A(43)申请公布日2018.09.04(21)申请号201810270734.X(22)申请日2018.03.29(71)申请人南京农业大学地址210000江苏省南京市玄武区卫岗1号(72)发明人黄小三邢才华刘月顾冰洁林泽崑董慧珍赵梁怡高俊芝李凌张绍铃胡轼(74)专利代理机构北京高沃律师事务所11569代理人刘奇(51)Int.Cl.C07K14/415(2006.01)C12N15/29(2006.01)C12N15/82(2006.01)A01H5/00(2018.01)权利要求书1页说明书12页序列表4页附图7页(54)发明名称杜梨抗寒转录因子PbrMYB5及其应用(57)摘要本发明涉及杜梨抗寒转录因子PbrMYB5及其应用，属于植物基因工程技术领域。本发明提供的抗寒转录因子PbrMYB5的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。本发明提供的抗寒转录因子能够显著提高植物的抗寒能力，能够为植物分子育种提供新的种质资源，为实施绿色农业、现代化农业提供新的遗传资源，有利于降低农业生产风险和实现农业可持续发展。CN108484742ACN108484742A权利要求书1/1页1.一种抗寒转录因子PbrMYB5，其特征在于，所述PbrMYB5的氨基酸序列如SEQIDNO.1所示。2.编码权利要求1所述的抗寒转录因子PbrMYB5的基因，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。3.一种克隆权利要求2所述基因的引物对，其特征在于，所述引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。4.权利要求1所述的转录因子PbrMYB5在提高植物VC含量中的应用。5.权利要求1所述的转录因子PbrMYB5在植物抗寒中的应用。6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述植物包括梨、烟草。7.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，编码所述转录因子PbrMYB5的基因通过农杆菌遗传转化方法转入植物中。2CN108484742A说明书1/12页杜梨抗寒转录因子PbrMYB5及其应用技术领域[0001]本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及杜梨抗寒转录因子PbrMYB5及其应用。背景技术[0002]梨是我国三大主要水果之一，其产业在国民经济中具有非常重要的经济价值(张绍铃等，2010)。数十年来，我国梨产业得到迅速发展，但其经常遭遇非生物逆境胁迫，尤其是低温冻害。低温不仅限制梨的栽培区域，周期性的低温冷害和冻害也使得梨的产量、品质降低，给梨产业造成巨大的经济损失，严重制约其发展。例如：2002-2003年冬，库尔勒香梨树遭受严重的冻害。全市梨树受冻害面积3866.60hm2，直接损失产值6000万元，间接损失约2亿元(曹佩燕等，2003)。因此，培育梨抗寒新品种将有利于梨产业健康、稳定和可持续发展。但梨育种常遇到以下难题：第一，由于梨是多年生木本植物，具有遗传背景复杂，自交不亲和、童期长等特点，传统的育种方法在梨上的应用非常困难，并且育种周期较长；第二，梨属植物缺乏抗寒性强的种质资源，制约了其抗寒育种的发展。近年来，植物生物技术特别是基因工程的飞速发展，为梨抗寒育种开辟了一条新的途径，而其前提和关键是解析低温应答的调控网络及发掘和鉴定重要的抗逆基因。[0003]植物通过诱导特异基因的表达来适应低温胁迫，低温胁迫应答基因分为功能基因和调控基因两类，前者在细胞内直接发挥保护作用，后者编码调节蛋白，参与胁迫信号转导和表达调控。转录因子(Transcriptionfactor)作为重要的调控基因，与顺式作用元件(cis-actingelement)形成复杂的蛋白质-DNA互作复合体，是控制基因表达的主开关。在胁迫信号传递、放大到最终做出响应过程中，转录因子起着关键作用。由于同一个转录因子可以与启动子上具有相同顺式作用元件的多个靶基因结合，超表达转录因子后可以调控下游多个靶基因，从而显著增强对单一胁迫或多个胁迫的抗性。由此可见，转录因子比功能基因在抗逆遗传改良中起到更重要的作用，是抗逆遗传工程的理想基因，能使转基因植物的抗性得到综合改良。目前果树上研究得比较多的转录因子有ICE1、bHLH、ABF、WRKY、NAC、ABF等，但仍缺乏适用于梨的抗寒基因或转录因子。发明内容[0004]本发明的目的在于提供杜梨抗寒转录因子PbrMYB5及其应用。本发明提供的抗寒转录因子能够显著提高植物中维生素C的含量，提高植物的抗寒能力，能够为植物分子育种提供新的种质资源，为实施绿色农业、现代化农业提供新的遗传资源，有利于降低农业生产风险和实现农业可持续发展。[0005]本发明提供了一种抗寒转录因子PbrMYB5，所述PbrMYB5的氨基酸序列如SEQ