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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN112056309A(43)申请公布日2020.12.11(21)申请号202011275371.2(22)申请日2020.11.16(71)申请人广州杜德生物科技有限公司地址510000广东省广州市黄埔区国际生物岛螺旋四路3号(1)栋第三层301、307单元(72)发明人张玲洁陈爱华张林艳(74)专利代理机构北京集佳知识产权代理有限公司11227代理人苏云辉(51)Int.Cl.A01N1/02(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图4页(54)发明名称一种细胞保存液及其在保存脐血NK细胞中的应用(57)摘要本发明涉及细胞培养技术领域,尤其涉及一种细胞保存液及其在保存脐血NK细胞中的应用。本发明公开了一种细胞保存液,包括:柠檬酸三钠、柠檬酸、葡萄糖、羟乙基淀粉、人血清白蛋白和水。本发明细胞保存液中柠檬酸三钠、柠檬酸、葡萄糖与羟乙基淀粉、人血清白蛋白协同配合,有效延长脐血的保存时间至72h,保证脐血NK细胞存活率和数量与保存前基本不变,并且能分离扩增培养到正常倍数和数量的NK细胞。CN112056309ACN112056309A权利要求书1/1页1.一种细胞保存液,其特征在于,包括:柠檬酸三钠、柠檬酸、葡萄糖、羟乙基淀粉、人血清白蛋白和水;每10mL所述细胞保存液中包括:柠檬酸三钠3.0-3.5g;柠檬酸0.01-0.05g;葡萄糖2.0-3.5g;羟乙基淀粉0.5-5g;人血清白蛋白1-5g;余量为水。2.根据权利要求1所述的细胞保存液,其特征在于,每10mL所述细胞保存液包括:柠檬酸三钠3g;柠檬酸0.03g;葡萄糖3g;羟乙基淀粉0.6g;人血清白蛋白2g;余量为水。3.根据权利要求1所述的细胞保存液,其特征在于,所述羟乙基淀粉的质量浓度为5%~10%。4.根据权利要求1所述的细胞保存液,其特征在于,所述人血清白蛋白的质量浓度为10%~30%。5.权利要求1至4任意一项所述的细胞保存液的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:先用5ml注射用水溶解柠檬酸三钠3.0-3.5g、柠檬酸0.01-0.05g、葡萄糖2.0-3.5g、羟乙基淀粉0.5-5g、人血清白蛋白1-5g,再用注射用水定容至10ml,4℃保存。6.根据权利要求1至4任意一项所述的细胞保存液在保存脐血NK细胞中的应用。7.一种脐血NK细胞的保存方法,其特征在于,包括以下步骤:向脐血中加入抗凝剂后,再加入权利要求1至4任意一项所述的细胞保存液中保存。8.根据权利要求7所述的保存方法,其特征在于,所述保存的温度为1~6℃。9.根据权利要求7所述的保存方法,其特征在于,所述脐血与所述细胞保存液的体积比为10:1。2CN112056309A说明书1/7页一种细胞保存液及其在保存脐血NK细胞中的应用技术领域[0001]本发明涉及细胞培养技术领域,尤其涉及一种细胞保存液及其在保存脐血NK细胞中的应用。背景技术[0002]自然杀伤细胞(naturalkillercell,NK)是人类血液系统中重要的免疫细胞。众所周知,机体防御体系的第一道防线就是NK细胞,其在免疫反应的早期可以分泌不同的细胞因子和各种趋化因子来调节机体获得性免疫应答,而且在天然免疫系统其发挥主要杀瘤效应,是机体发挥免疫效应不可或缺的效应细胞。[0003]脐血来源丰富,目前脐血也成为NK细胞的主要来源之一。为了保持新鲜脐血NK细胞的活性,目前常采用的是添加肝素钠进行采集,采集后一般是4小时内必须处理,也有研究表明:在保持脐血与抗凝剂正常比例情况下,临床新鲜脐血37℃保存7小时内进行Ficoll分离法富集NK可达到较好富集效果,这给脐血采集和单个核细胞的分离工作造成了一定的限制。发明内容[0004]有鉴于此,本发明提供了一种细胞保存液及其在保存脐血NK细胞中的应用,该细胞保存液在保持脐血NK细胞的活性的条件下,可延长脐血保存时间至72h。[0005]其具体技术方案如下:本发明提供了一种细胞保存液,包括:柠檬酸三钠、柠檬酸、葡萄糖、羟乙基淀粉、人血清白蛋白和水。[0006]实验证明,本发明提供的细胞保存液可以提供细胞营养,有效维持脐血NK细胞在保存期间的活性,使得NK细胞的存活率和数量在72h内基本保持不变,并能分离扩增培养到正常倍数和数量的NK细胞。[0007]本发明中,每10mL细胞保存液中包括:柠檬酸三钠3.0-3.5g;柠檬酸0.01-0.05g;葡萄糖2.0-3.5g;羟乙基淀粉1-5ml;人血清白蛋白1-5ml;余量为水。[0008]优选地,每10mL细胞保存液中包括:柠檬酸三钠3g;柠檬酸0.03g;葡萄糖3g;羟乙基淀粉0.6g;3CN112056309A说明书2/7页人血清白蛋白2g;余量为水。[0009]本发明中