等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点.doc
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实验三等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点一、实验目的了解等电聚焦的原理。通过蛋白质等电点的测定,掌握聚丙烯酰胺凝胶垂直管式等电聚焦电泳技术。二、实验原理等电聚焦(Isoelectricfocusing,简称IEF)是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展,已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点(pI)只差0.001pH单位的生物分子。由于其分辨力高,重复性好,样品容量大,操作简便迅速,在生物化学、分子生物学及临床医学研
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等电聚焦电泳背景介绍基本原理如果在电泳系统中建立一个由阳极至阴极,pH由低到高(即环境由酸到碱)的连续而稳定的pH梯度,则处于一个系统的各种蛋白质分子,将根据各自的pI值与所处位点的oH值的差别带上正电或负电。载体两性电解质pH梯度(carrierampholytepHgradient)等电聚焦,即在电场中通过两性缓冲离子建立pH梯度。固相pH梯度(immobilizedpHgradients,IPG)等电聚焦,是利用一系列具有弱酸或弱碱性质的丙烯酰胺衍生物滴定时,在滴定终点附近形成pH梯度并参与丙烯酰胺
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实验六凝胶等电聚焦电泳法测定蛋白质等电点.一实验原理等电聚焦(isoelectricfocusing)又称电聚焦(elcctrofocusing)、聚焦电泳(fousielectrophoresis)等。蛋白质(酶)、多肽等两性电解质其所带电荷的性质和数量随所处环境的pH而变化。环境pH低于其等电点时带正电荷在电场中向阴极移动;环境
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