转基因米粉标准样品、其建立方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102690885A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102690885A(43)申请公布日2012.09.26(21)申请号201210172207.8(22)申请日2012.05.30(71)申请人曹际娟地址116001辽宁省大连市中山区长江东路60号申请人徐君怡于兵曹冬梅(72)发明人曹际娟徐君怡于兵曹冬梅(74)专利代理机构大连东方专利代理有限责任公司21212代理人贾汉生(51)Int.Cl.C12Q1/68(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书1212页页序列表序列表22页页附图附图11页页(54)发明名称转基因米粉标准样品、其建立方法及应用(57)摘要本发明公开一种转基因米粉BT63的标准样品制备、其建立方法及其在检测转基因水稻BT63中的应用，分别以转基因水稻BT63为原料，将原料研磨、过筛、加水，搅拌、制备成冻干粉；再分装,0℃~4℃贮存；通过上述方法获得转基因米粉BT63的标准样品，也可以应用于转基因水稻BT63的Real-TimePCR检测试剂盒。这对全面深入的研究解决转基因成分检测标准样品的制备技术和稳定性保证技术，积极开展我国转基因产品检测标准样品的研制，添补该测量领域的空白，具有很重要的现实意义。CN1026985ACN102690885A权利要求书1/1页1.转基因米粉BT63标准样品，其特征在于，由下述方法制备，步骤包括：将原料研磨成粉末，过100目筛，将过筛后的粉末收集，向粉末中加入4倍质量的水，搅拌均匀后，放置于中试冻干机中低温真空冷冻干燥制备成冻干粉；分装后于0℃~4℃贮存；上述低温真空冷冻干燥的步骤包括：①样品预冻：先把样品在-80℃冷冻2h；②冷冻过程：关好冰冻干燥机的干燥室门，开始干燥室制冷；干燥室温度降至-35℃时，开始冷却阱制冷；冷却阱制冷温度降至-40℃时，将步骤①处理的样品迅速放入干燥室内，关好干燥室门；启动真空泵开始抽真空；当真空度降至0.5Torr时，结束冷冻过程；③样品干燥：干燥室的温度设置为15℃,当真空度降至0.1Torr时，样品已干燥好；④关闭真空泵，使干燥室与外界大气相通，待内外气压平衡后，打开干燥室门，取出样品，迅速旋紧瓶盖。2.一种转基因水稻BT63的Real-TimePCR检测试剂盒，其特征在于，包括转基因米粉BT63检测基因和阳性标准对照品：阳性标准对照品：是权利要求2所述的转基因米粉BT63标准样品；转基因米粉BT63检测基因，包括：SPS基因的检测引物和探针序列正向引物SEQIDNO：1反向引物SEQIDNO：2探针SEQIDNO：3cry1Ac/NOS基因的检测引物和探针序列正向引物SEQIDNO：4反向引物SEQIDNO：5探针SEQIDNO：6。2CN102690885A说明书1/12页转基因米粉标准样品、其建立方法及应用技术领域[0001]本发明属于转基因食品检测技术领域，具体涉及转基因米粉BT63的标准样品制备、其建立方法及其在检测转基因米粉BT63中的应用。背景技术[0002]水稻是人民生活的主粮，我国又是水稻的主产区，每年我国出口到日本、韩国等国家的糙米、大米等产品占我国水稻产量的近1/3。为提高水稻产量，我国在转基因水稻研究方面已经进行了广泛深入的研究，并取得了可喜的成果，但并未批准进行商业化种植。然而，去年在湖北等国内市场上出现了未经商业化批准种植的转BT基因大米的销售，并被国外检测公司公布于众。这给我国农产品的贸易带来了非常不好的影响。为此，韩国、日本等国对我国出口的糙米、大米等产品要求批批实施转基因的检测。[0003]转Bt基因抗虫水稻尚未在全球任何地区获准种植，对于Bt转基因水稻也未通过任何环境影响评估和人类食品安全评估。但是，从其它Bt转基因作物（如玉米和棉花）的研究结果中，已经可以推断出Bt水稻会对环境造成极大的影响，并且引起人类食品安全问题。[0004]2006年以来，我国出口的米制品中多次被欧盟和日本检出转基因水稻成分，其中多为我国研发的转基因水稻汕优63号（BT63）。由于我国尚未向转基因水稻发放生物安全证书，出口米制品中检出转基因水稻成分对我国的米制品出口贸易造成了一定影响。与出口米制品类似，我国检验检疫部门也从美国进口的大米中检出了未经我国批准进境的抗除草剂转基因水稻成分。[0005]开展转基因成分检验标准样品的研制在保证测试结果的可比性和溯源性，保障食品安全，解决贸易争端，促进经济发展等方面均具有重要的意义。2008年，我们首次研制了转基因玉米Mon810品系、NK603品系、T25品系、BT11品系、转基因油菜RT73品系标准样品以及相应的分子DNA标准样品，填补了国内空白。这些标准样品在转基因产品检测工作中发挥了巨大作用。然而，在我国米