梅久兰链霉菌ZW-1菌株及其发酵液的抑菌用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102835423A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102835423A(43)申请公布日2012.12.26(21)申请号201210268992.7C12R1/465(2006.01)(22)申请日2012.08.01(71)申请人淮海工学院地址222000江苏省连云港市新浦区苍梧路59号淮海工学院海洋学院马桂珍转(72)发明人马桂珍暴增海王淑芳吴少杰付泓润葛平华(74)专利代理机构南京众联专利代理有限公司32206代理人刘喜莲(51)Int.Cl.A01N63/02(2006.01)A01P3/00(2006.01)C12N1/20(2006.01)C12N1/02(2006.01)C12Q1/04(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书66页页(54)发明名称梅久兰链霉菌ZW-1菌株及其发酵液的抑菌用途(57)摘要本发明是一种梅久兰链霉菌ZW-1菌株及其发酵液的抑菌用途，所抑的菌为：小麦雪腐镰刀菌、小麦赤霉病菌、斑点落叶病菌、油菜菌核病菌、菠菜早疫病菌、玉米圆斑病菌、西瓜枯萎病菌或者棉花枯萎病菌。本发明梅久兰链霉菌ZW-1及其发酵液可抑制植物病原真菌菌丝的生长，导致病原真菌菌丝细胞壁膨大，原生质体浓缩，并可抑制菠菜早疫病菌分生孢子的萌发和芽管的伸长，抑菌效果好，具有良好植物病害生物防治的开发应用前景。CN1028354ACN102835423A权利要求书1/1页1.一种梅久兰链霉菌ZW-1（Streptomycesmediolanistrainzw-1）及其发酵液的抑菌用途，所抑的菌为：小麦雪腐镰刀菌（Fusariumnivale）、小麦赤霉病菌（Fusariumgraminearum）、斑点落叶病菌（Alternaria.alternata）、油菜菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)、菠菜早疫病菌（Alternariasolani）、玉米圆斑病菌（Helminthosporiumcarbonum）、西瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporumf.sp.niveum)或者棉花枯萎病菌（Fusariumoxysporumf.sp.vasinfectum）。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的梅久兰链霉菌ZW-1是通过以下方法分离得到：（1）分离纯化：从连云港海域的连岛、高公岛采集海水、海泥、近海土样、海洋动、植物样品，25℃，180r/min富集振荡培养5d；采用稀释平板分离法分离放线菌，三区划线纯化后转接到高氏一号斜面培养基上；（2）菌株的筛选：采用平板对峙法，取直径5mm植物病原真菌菌苔置于PDA平板中央，在真菌菌胎四周对称位置，距离平皿边缘15mm处划线接种分离到的海洋放线菌不同菌株，25℃倒置恒温培养，观察真菌菌丝生长情况，5d后测量抑菌带宽度，每个菌株为一处理，以不接放线菌对照，重复3次；选取一株对所述的8种植物病原真菌的抑菌带宽度平均值大于8mm、发酵液的抑菌带宽度高于5mm的菌株，记为ZW-1菌株；（3）菌株的鉴定：采用插片法，将ZW-1菌株划线接种到高氏一号培养基平板上，将灭菌的盖玻片以45°角插入划线接种部位的培养基内，28℃条件下分别于培养4、6、8d取出盖玻片，观察菌丝及孢子丝形态特征；同时进行生理生化试验，并进行16SrDNA测序分析；根据形态学和生理生化试验结果初步认为菌株ZW-1属于链霉菌属（Streptomyces）；16SrDNA的同源性分析表明,ZW-1菌株最接近于Streptomycesmediolani，二者的16SrDNA序列相似性为99%，ZW-1菌株鉴定为梅久兰链霉菌（Streptomycesmediolani）。2CN102835423A说明书1/6页梅久兰链霉菌ZW-1菌株及其发酵液的抑菌用途技术领域[0001]本发明涉及一种来自海洋的链霉菌菌株的用途，特别是梅久兰链霉菌ZW-1菌株及其发酵液的抑菌用途。背景技术[0002]生物防治已经成为植物病害防治的重要手段。但目前用于生物防治的微生物菌株多数来自于陆地，而多年来对陆地微生物的筛选，导致筛选到产生新型抗病机制的微生物的几率越来越低，因而越来越多的人们把目光投向了海洋，希望从海洋环境中极具多样性的微生物中开发出新型抗病原菌活性物质，用于植物病害的生物防治。近几年以来，从海洋中寻找微生物新种和具有特殊功能的生理活性物质成为国内外的研究热点，海洋微生物已经成为农用抗生素的新资源。[0003]海洋放线菌是海洋微生物中一类特殊的、具有重要经济价值的微生物,据不完全统计,近年来50%以上新发现的海洋微生物活性物质是由海洋放线菌这个庞大的分类群产生的，许多放线菌的次生代谢产物具有医药和植物保护方面的用途，已广泛用作抗细菌、抗真