一种阿维菌素产生菌及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103834605103834605A(43)申请公布日2014.06.04(21)申请号201210477320.7(22)申请日2012.11.21(83)生物保藏信息CGMCCNo.66782012.10.18(71)申请人中国科学院上海有机化学研究所地址200032上海市徐汇区零陵路345号申请人中国科学院上海有机化学研究所湖州生物制造创新中心(72)发明人刘文赵群飞(74)专利代理机构上海一平知识产权代理有限公司31266代理人祝莲君雷芳(51)Int.Cl.C12N1/21(2006.01)C12P19/62(2006.01)C12N15/76(2006.01)C12R1/465(2006.01)权利要求书2页权利要求书2页说明书12页说明书12页序列表7页序列表7页附图1页附图1页(54)发明名称一种阿维菌素产生菌及其制备方法和应用(57)摘要本发明涉及一种阿维菌素产生菌及其制备方法和应用。具体地，对野生型的阿维菌素产生菌中的aveD基因进行失活，可以获得消除A组分，只产生B组分的菌株；对aveD基因和aveC基因同时失活，并在此基础上回补aveC的同源基因（优选梅岭霉素生物合成基因簇中的meiC基因），获得的突变体发酵产物中95wt%以上都为阿维菌素B2a。将产物阿维菌素B2a作为前体，可以直接用于大量合成高纯度的阿维菌素B1a和伊维菌素。CN103834605ACN1038465ACN103834605A权利要求书1/2页1.一种阿维菌素产生菌，其特征在于，所述的产生菌的发酵产物中，阿维菌素B2a组分的相对含量满足式I：B/A≥35%式I其中，B为发酵产物中阿维菌素B2a组分的质量；A为发酵产物中所有阿维菌素组分总的质量。2.如权利要求1所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，所述产生菌的基因组中的aveD基因被失活、或aveD基因功能丧失、或aveD基因缺失、或不表达aveD基因、或不表达AveD蛋白、或表达的AveD蛋白无功能。3.如权利要求2所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，所述产生菌的基因组中aveC基因被失活、或aveC基因功能丧失、或aveC基因缺失；或不表达aveC基因、或不表达AveC蛋白、或AveC蛋白无功能；并且，所述产生菌的基因组中含有或表达aveC的同源基因；或所述产生菌中表达AveC蛋白的同源蛋白。4.如权利要求3所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，所述aveC的同源基因选自下组：美贝霉素(Milbemycin)生物合成基因milC、奈克马丁（nemadectin）生物合成基因nemC，梅岭霉素（meilingmycin）生物合成基因meiC。5.如权利要求1所述的阿维菌素产生菌，其特征在于，它是除虫链霉菌（Streptomycesavermectinius）mVL1003，保藏编号为CGMCCNo.6678。6.权利要求1中所述的阿维菌素产生菌的用途，其特征在于，它被用做发酵生产阿维菌素B2a组分的工程菌。7.一种制备阿维菌素B2a组分的方法，其特征在于，包括步骤：(a)培养权利要求1所述的阿维菌素产生菌，从而获得含有阿维菌素B2a的发酵产物；和(b)从发酵产物中分离出所述的阿维菌素B2a组分。8.一种生产阿维菌素B1a组分的方法，其特征在于，包括步骤：(a)培养权利要求1所述的阿维菌素产生菌，从而获得含有阿维菌素B2a组分的发酵产物；(b)从发酵产物中分离出所述的阿维菌素B2a组分；和(c)将分离的阿维菌素B2a转化为阿维菌素B1a组分。9.一种生产伊维菌素的方法，其特征在于，包括步骤：(a)培养权利要求1所述的阿维菌素产生菌，从而获得含有阿维菌素B2a组分的发酵产物；(b)从发酵产物中分离出所述的阿维菌素B2a组分；和(c)将分离的阿维菌素B2a组分转化为伊维菌素。10.一种制备阿维菌素产生菌的方法，其特征在于，包括步骤：(1)对生产伊维菌素的出发菌进行aveD基因和或AveD蛋白的遗传改造，从而获得基因组中aveD基因失活、或aveD基因功能丧失、或aveD基因缺失、或不表达aveD基因、或不表2CN103834605A权利要求书2/2页达AveD蛋白、或表达的AveD蛋白无功能的阿维菌素产生菌；并且，在所述生产伊维菌素的出发菌的发酵产物中，阿维菌素B2a组分的相对含量满足式II：B/A＜35%式II其中，B为发酵产物中阿维菌素B2a组分的质量；A为发酵产物中所有阿维菌素组分总的质量。11.一种基因组合，其特征在于，所述的基因组合与出发（或原始）的生产伊维菌素的基因组合相比，具有选自下组的一个或多个特征：(1)所述基因组合中，aveD基因被失活、或aveD基因功能丧失、或aveD基因缺