一种单宁酶固态发酵培养基制备方法及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107904218A(43)申请公布日2018.04.13(21)申请号201711473886.1(22)申请日2017.12.29(71)申请人集美大学地址361021福建省厦门市集美银江路185号(72)发明人吴昌正肖安风蔡慧农倪辉杜希萍姜泽东杨秋明黄高凌(74)专利代理机构厦门律嘉知识产权代理事务所(普通合伙)35225代理人张辉温洁(51)Int.Cl.C12N9/18(2006.01)C12R1/69(2006.01)权利要求书2页说明书4页(54)发明名称一种单宁酶固态发酵培养基制备方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1固态发酵培养基原料预处理；步骤2固体基质外加营养液制备；步骤3培养料制备及灭菌。本发明还包括一种单宁酶固态发酵培养基的应用。本发明所述的单宁酶固态发酵培养基制备方法及其应用，充分利用农林废弃物杨梅叶、杨梅枝和水稻秸秆作为固态发酵基质生产高经济价值的单宁酶，实现了农林废弃物的高值化利用，对进一步完善我国南方几大杨梅产区和水稻产区的废弃综合物利用产业链具有推动作用。CN107904218ACN107904218A权利要求书1/2页1.一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1固态发酵培养基原料预处理：取应季修剪的杨梅枝叶，按叶和枝条分开；新鲜杨梅叶用热风吹至半风干，再将半风干的杨梅叶转入烘箱中烘干；杨梅枝直接用烘箱烘干；取烘干的杨梅叶粉碎过筛，取筛下物备用；将烘干的杨梅枝扎成小段，粉碎后过筛，取筛下物备用；取烘干或者晒干的水稻秸秆，截成小段，备用；将杨梅叶粉末、杨梅枝粉末及水稻秆段按照质量比1：1：1-3：3：1的比例混合，充分搅拌均匀，让水稻秆均匀分布在粉末中；步骤2固体基质外加营养液制备：准备下述重量份的原料：葡萄糖40-60g，单宁酸3-8g，玉米浆3-8mL，硫酸铵10-30g，将上述原材料完全溶解于1L去离子水中；调节营养液pH至5-6，获得固体基质外加营养液；步骤3培养料制备及灭菌：将混合均匀的杨梅叶粉末、杨梅枝粉末及水稻秆段作为固体基质，与固体基质外加营养液按照质量体积比1：2-1：3，混合并搅拌均匀制备获得培养料；培养料经灭菌后获得单宁酶固态发酵培养基。2.根据权利要求1所述的一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，步骤1所述的新鲜杨梅叶用热风吹至半风干为将新鲜杨梅叶用30-50℃热风吹12-24小时，使新鲜杨梅叶水分逐步丢失但叶表维持绿色；步骤1所述的半风干的杨梅叶采用70-90℃烘干。3.根据权利要求1所述的一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，步骤1中所述的烘干的杨梅叶粉碎后过30-50目筛；步骤1中所述的杨梅枝粉碎后过10-30目筛；步骤1中所述的水稻秸秆截成长度为0.2-0.3cm的小段。4.根据权利要求1所述的一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，步骤2中所述的pH为5.5。5.根据权利要求1所述的一种单宁酶固态发酵培养基的制备方法，其特征在于，步骤3所述的灭菌方法为121℃高压蒸汽灭菌10min。6.一种单宁酶固态发酵培养基的应用，其特征在于：采用权利要求1-5任一权利要求所述的单宁酶固态发酵培养基应用于单宁酶的制备。7.根据权利要求6所述的所述的一种单宁酶固态发酵培养基的应用，其特征在于：单宁酶的制备包括以下步骤：步骤1：将产单宁酶丝状真菌菌株打碎制备菌体悬液接入固态发酵培养基中，搅拌均匀；步骤2：遮光，恒温静置培养，发酵后可获得最高单宁酶。8.根据权利要求6所述的所述的一种单宁酶固态发酵培养基的应用，其特征在于：所述的产单宁酶丝状真菌菌株为米曲霉。9.根据权利要求6所述的所述的一种单宁酶固态发酵培养基的应用，其特征在于：步骤1中每15g单宁酶固态发酵培养基加入8mL菌体悬液。10.根据权利要求6所述的所述的一种单宁酶固态发酵培养基的应用，其特征在于：步2CN107904218A权利要求书2/2页骤2中恒温稳定为25-35℃，所述的发酵时间为72-120h。3CN107904218A说明书1/4页一种单宁酶固态发酵培养基制备方法及其应用技术领域[0001]本发明涉及单宁酶制备领域，特别涉及一种单宁酶固态发酵培养基制备方法及其应用。背景技术[0002]单宁酶(Tannase，EC3.1.1.20)全称单宁酯酰水解酶，可以水解没食子酸单宁生成没食子酸和葡萄糖。单宁酶在自然界中有相当广泛的分布，早在20世纪20年代就有人在进行黑曲霉培养时发现菌丝内含有单宁酶，以后又陆续发现各类微生物，包括真菌、酵母、细菌都能产生单宁酶；单宁酶还存在于一些富含单宁的植物材料中，例如茶叶提取物中可以检