一种用于鉴别蜡杨梅雌雄的分子标记、引物对及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108085405A(43)申请公布日2018.05.29(21)申请号201710221205.6(22)申请日2017.04.06(71)申请人浙江大学地址310013浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号(72)发明人高中山贾慧敏王妍赵海波汪国云焦云柴春燕(74)专利代理机构杭州天勤知识产权代理有限公司33224代理人沈自军(51)Int.Cl.C12Q1/6895(2018.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书1页说明书8页序列表5页附图1页(54)发明名称一种用于鉴别蜡杨梅雌雄的分子标记、引物对及其应用(57)摘要本发明公开了一种用于鉴别蜡杨梅雌雄的分子标记、引物对及其应用。所述分子标记，为蜡杨梅雌性特异的基因片段MC-FT1，其核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。所述引物对，包括上游引物和下游引物，核苷酸序列为：上游引物：5′-GGATCCTGATGCGCCCAGTCC-3′；下游引物：5′-GAAAAGATCGATTTGATAC-3′。利用本发明引物对进行PCR鉴定蜡杨梅性别，对蜡杨梅的幼苗鉴定，尽早排除雄株，有效降低蜡杨梅雄株对人们健康的威胁，同时能避免栽培杨梅受到蜡杨梅花粉的影响，优化栽培杨梅的生长环境，以保证其果实质量和商品价值。CN108085405ACN108085405A权利要求书1/1页1.一种用于鉴别蜡杨梅雌雄的分子标记，为蜡杨梅雌性特异的基因片段MC-FT1，其核苷酸序列如SEQIDNo.3所示。2.引物对，包括上游引物和下游引物，其特征在于，核苷酸序列为：上游引物：5′-GGATCCTGATGCGCCCAGTCC-3′；下游引物：5′-GAAAAGATCGATTTGATAC-3′。3.如权利要求2所述引物对在鉴别蜡杨梅性别中的应用。4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述蜡杨梅为蜡杨梅幼苗。5.如权利要求2所述引物对在制备用于鉴别蜡杨梅性别的试剂盒中的应用。6.一种包含如权利要求2所述引物对的试剂盒。7.如权利要求6所述试剂盒在鉴别蜡杨梅性别中的应用。8.一种鉴别蜡杨梅性别的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对待检测蜡杨梅植株取样并提取基因组DNA；(2)以所述基因组DNA为模板，利用权利要求2所述引物对进行PCR扩增；(3)PCR扩增产物进行电泳检测，若电泳检测结果在159bp和197bp处均有特异性条带，则待检测蜡杨梅植株为雌株；若电泳检测结果只在197bp处有特异性条带，则待检测蜡杨梅植株为雄株。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的体系为：10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸10s，共35个循环；72℃延伸10min。2CN108085405A说明书1/8页一种用于鉴别蜡杨梅雌雄的分子标记、引物对及其应用技术领域[0001]本发明涉及分子鉴别技术领域，特别是涉及一种用于鉴别蜡杨梅雌雄的分子标记、引物对及其应用。背景技术[0002]蜡杨梅(MyricaceriferaL.或者Morellacerifera)属于杨梅科杨梅属植物，原产于美国海滨地区，是常绿灌木或小乔木，高2-3m，为雌雄异株植物。叶片蜡质，叶被充满黄色腺孔，具有浓烈香气；雌花为葇荑花序，自3月下旬至4月上旬开放，4月上旬为盛花期，花期约30天，雄花为复葇荑花序，自3月下旬至4月下旬陆续开放，4月中旬为盛花期，花期约50天，比杨梅花期略晚；果实蓝色，外被蜡质层，直径3mm左右，冬季不落。蜡杨梅为滨海植物，喜光，具有一定的耐盐碱、耐寒、耐水湿的能力，适生于沿海地区和滩涂地，目前，蜡杨梅在浙江余姚，慈溪等地均有栽培，生长旺盛，绿化效果好。[0003]杨梅(MyricarubraSieb.&Zucc.)属于杨梅科杨梅属植物，原产于我国东南各省及云贵高原，栽培历史悠久，是我国南方的特色水果，目前杨梅主栽品种分布在我国浙江，江苏、福建、江西、湖南、广东、贵州和云南等省，其中浙江省的栽培面积、产量、质地等均为最佳。杨梅果实成熟期(6月份)恰逢一年中的水果淡季，能够有效填补市场上的水果空缺期，再加上杨梅果色艳丽，风味独特，同时富含花青苷，具有较高的营养价值，深受消费者的喜爱。[0004]杨梅喜土质疏松、排水良好、富含石砾的土层深厚的土壤，不适宜在偏盐碱的滩涂地生长。有研究证明，以蜡杨梅为砧木，荸荠、东魁、晚稻杨梅为接穗，成活率均大于90％，使得这些栽培杨梅能够充分利用土地资源，逐渐形成沿海经济林树种，将绿化与生产有机结合在一起，具有较大的经济效益。[0005]不过，蜡杨梅为雌雄异株植物，雄株花期比较长，花粉大量产生，其花粉能不能