一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108445133A(43)申请公布日2018.08.24(21)申请号201810281233.1(22)申请日2018.04.02(71)申请人杨梅地址556000贵州省黔东南苗族侗族自治州凯里市文化北路20号农检中心(72)发明人杨梅孙思王安波刘文锋汪俭潘承丹(74)专利代理机构贵阳东圣专利商标事务有限公司52002代理人袁庆云(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)权利要求书2页说明书9页(54)发明名称一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法(57)摘要本发明公开了一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法，主要由提取、净化、衍生和定量定性分析四个步骤组成；选用氢氧化钠作为提取溶液；HCl调节酸度，经PSA净化，氯甲酸（9-芴甲基）酯(FMOC-Cl)衍生化，选择5mmol/L甲酸铵/甲醇+5mmo/L甲酸铵水溶液（V:V）梯度洗脱，正离子多反应监测（MRM）测定，外标法定量。本发明能同时测定茶叶中草铵膦和草甘膦药物除草剂残留量，简化样品净化步骤、节省前处理时间和耗材成本，适用于大批量的样品分析，高效、准确、重复性好、灵敏度高。CN108445133ACN108445133A权利要求书1/2页1.一种检测茶叶中草铵膦和草甘膦药物残留量的方法，包括以下步骤：（1）茶叶按GB/T8303经粉碎过筛,制得待测茶样；（2）样品的提取精密称取1±0.01g茶叶样品，置于50mL离心管中，加入10mL0.02mol/L-0.07mol/LNaOH溶液，涡旋混匀1min；室温水浴振荡提取20min，经10000r/min离心5min，上清液用滤纸过滤至10mL离心管中，得提取液Ⅰ；（3）样品的净化取2mL提取液Ⅰ加入0.5mol/L-2mol/LHCl溶液20μL，涡旋混匀后10000r/min离心5min取上清液得提取液Ⅱ，将取液Ⅱ倒入预先称好0.2gPSA的10mL离心管中，并立即涡旋混匀，10000r/min离心5min取上清液得提取液Ⅲ；（4）待测液制备取提取液Ⅲ1mL置于10mL离心管中，加入0.2mL的40g/L-60g/L硼酸钠缓冲溶液，摇匀后再加入0.2mL10g/L-30g/L的氯甲酸（9-芴甲基）酯衍生试剂，涡旋混匀振摇后37℃静置过夜10h-16h，衍生后的样品经10000r/min离心5min后，过水系0.22μm滤膜，得待测液；(5)配制基质匹配标准衍生混标溶液将空白样品经步骤（1）至步骤（3）处理，用该空白样品提取液在质量浓度为0.005μg/mL-0.50μg/mL范围内，配制至少五个浓度的草铵膦和草甘膦系列基质匹配标准混标溶液，采用与步骤（4）相同的方法对各浓度混标溶液进行衍生，制得系列基质匹配标准衍生混标溶液；（6）液相色谱-串联质谱法测定a)仪器参数①色谱参数：采用2.1mm×100mm、1.8μm的超高效液相HSST3色谱柱；柱温40℃；样品温度20℃；进样量1μL；梯度洗脱程序为：流速保持0.4mL/min不变,在0-0.5min时，流动相5mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从10%变为20%，流动相5mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从90%变为80%；在0.5-2.5min时，流动相5mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从20%变为95%，流动相5mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从80%变为5%；在2.5-4.0min时，流动相5mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例为95%，流动相5mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例为5%，且二者均保持不变；在4.0-4.1min时，流动相5mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例从95%变为10%，流动相5mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例从5%变为90%；在4.1-5.0min时，流动相5mmol/L甲酸铵/甲醇溶液的体积比例为10%，流动相5mmo/L甲酸铵水溶液的体积比例为90%,且二者均保持不变；②质谱参数：采用电喷雾离子源；正离子扫描，多反应监测，脱溶剂氮气温度500℃、流速1000L/Hr，离子源温度150℃，锥孔气流量50L/Hr，毛细管电压3.0kV，碰撞气为氩气；草铵膦衍生物的母离子为404，子离子分别为136、179和208，锥孔电压V为25，碰撞能量eV为25、10和10，其中m/z404>136为定量离子对；草甘膦衍生物的母离子为392，子离子为88、179和214，锥孔电压V为25，碰撞能量eV为20、10和10，其中m/z392>88为定量离子对；b)定性分析在相同实验条件下进行样品测定时，如果检出的衍生后待测液中目标化合物色谱峰的保留时间与标准样品相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，目标化合物的质谱定性2CN10844