一种壳寡糖的制备及纯化方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109553648A(43)申请公布日2019.04.02(21)申请号201710881482.X(22)申请日2017.09.26(71)申请人肖梅地址212136江苏省镇江市新区姚桥镇小圩埭15-1号(72)发明人肖梅(51)Int.Cl.C07H3/04(2006.01)C07H3/06(2006.01)C07H1/00(2006.01)C07H1/06(2006.01)C08B37/08(2006.01)C12P19/26(2006.01)权利要求书1页说明书2页(54)发明名称一种壳寡糖的制备及纯化方法(57)摘要本发明公开了一种壳寡糖的制备及纯化方法，包括以下步骤：取干燥至恒重的壳聚糖，加入HCl溶液，调节PH值；加入壳聚糖酶液，保温2h～6h，然后沸水浴加热灭酶；在50℃以下旋转蒸发浓缩，然后放入冷冻干燥机中冷冻干燥，得壳寡糖粗提物；将壳寡糖粗提物溶于NH4HCO3溶液，待完全溶解后，用滤膜过滤得壳寡糖溶液；将树脂倒入层析柱中，用NH4HCO3冲洗树脂至树脂压实，将壳寡糖溶液缓慢倒入层析柱中洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发浓缩得壳寡糖。本发明优点：采用壳聚糖酶降解壳聚糖制备壳寡糖，并通过凝胶柱层析分离纯化制备单一聚合度的壳寡糖，纯度可达97％以上，所制备得到的壳寡糖具有良好的降血脂活性，保护肝脏的作用，还能够增强机体的抗氧化活性。CN109553648ACN109553648A权利要求书1/1页1.一种壳寡糖的制备及纯化方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一：取干燥至恒重的壳聚糖，配置成底物浓度为1％～10％的溶液，加入HCl溶液，调节PH值至4.1～6.5；步骤二：加入壳聚糖酶液，在35℃～70℃下保温2h～6h，然后沸水浴加热10min～15min，灭酶；步骤三：在50℃以下旋转蒸发浓缩，然后放入冷冻干燥机中冷冻干燥2h～18h，得壳寡糖粗提物；步骤四：将壳寡糖粗提物溶于NH4HCO3溶液，待完全溶解后，用0.2μm～0.3μm的滤膜过滤得壳寡糖溶液；步骤五：将树脂倒入层析柱中，用NH4HCO3冲洗树脂至树脂压实，将壳寡糖溶液缓慢倒入层析柱中，并用NH4HCO3溶液洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发浓缩得壳寡糖。2.根据权利要求1所述的一种壳寡糖的制备及纯化方法，其特征在于：在步骤一中，HCl溶液的物质的量浓度为0.1mol/L。3.根据权利要求1所述的一种壳寡糖的制备及纯化方法，其特征在于：在步骤二中，壳聚糖酶液的加酶量为40U/g～65U/g。4.根据权利要求1所述的一种壳寡糖的制备及纯化方法，其特征在于：在步骤三中，旋转蒸发浓缩后的体积为原体积的1/3。5.根据权利要求1所述的一种壳寡糖的制备及纯化方法，其特征在于：在步骤五中，NH4HCO3溶液的物质的量浓度为0.1mol/L。2CN109553648A说明书1/2页一种壳寡糖的制备及纯化方法技术领域[0001]本发明涉及一种壳寡糖的制备及纯化方法。背景技术[0002]壳聚糖来源于虾、蟹壳，是由甲壳素在浓碱或脱乙酰酶的作用下，脱去N上的乙酰基获得的，由一定比例的氨基葡萄糖和N-乙酰氨基葡萄糖经β-(1,4)糖苷键连接而成，在食品工业中是一种天然、无毒的保鲜剂、絮凝剂，且可吸附水中镉、汞、铜等重金属离子，但壳聚糖分子量大，不溶于水，不易于被生物体吸收，因此，将壳聚糖降解，获得分子量小、水溶性好、易于人体吸收的壳寡糖就显得十分必要，但是，高纯度的壳寡糖单体难以制备，往往采用壳寡糖混合物进行生物活性评价，限制了壳寡糖生物活动机理的深入研究。发明内容[0003]发明目的：针对上述问题，本发明的目的是提供一种壳寡糖的制备及纯化方法，获得单一聚合度壳寡糖。[0004]技术方案：一种壳寡糖的制备及纯化方法，包括以下步骤：[0005]步骤一：取干燥至恒重的壳聚糖，配置成底物浓度为1％～10％的溶液，加入HCl溶液，调节PH值至4.1～6.5；[0006]步骤二：加入壳聚糖酶液，在35℃～70℃下保温2h～6h，然后沸水浴加热10min～15min，灭酶；[0007]步骤三：在50℃以下旋转蒸发浓缩，然后放入冷冻干燥机中冷冻干燥2h～18h，得壳寡糖粗提物；[0008]步骤四：将壳寡糖粗提物溶于NH4HCO3溶液，待完全溶解后，用0.2μm～0.3μm的滤膜过滤得壳寡糖溶液；[0009]步骤五：将树脂倒入层析柱中，用NH4HCO3冲洗树脂至树脂压实，将壳寡糖溶液缓慢倒入层析柱中，并用NH4HCO3溶液洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发浓缩得壳寡糖。[0010]进一步的，在步骤一中，HCl溶液的物质的量浓度为0.1mol/L。[0011]进一步的，在步骤二中，壳聚糖酶液的加酶量为40U/g～65U/g。[0012]进