一种快速鉴定真梅/杏梅品系的分子检测方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN110698550A(43)申请公布日2020.01.17(21)申请号201911096082.3(22)申请日2019.11.11(71)申请人北京林业大学地址100083北京市海淀区清华东路35号北京林业大学(72)发明人郑唐春张启翔李平李璐璐程堂仁王佳袁存权(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人商秀玲(51)Int.Cl.C07K14/415(2006.01)C12N15/29(2006.01)C12N15/11(2006.01)C12Q1/6895(2018.01)权利要求书2页说明书7页序列表4页附图3页(54)发明名称一种快速鉴定真梅/杏梅品系的分子检测方法(57)摘要本发明涉及植物基因工程与分子生物学技术领域，具体涉及一种快速鉴定真梅/杏梅品系的分子检测方法。本发明提供梅花PmEIL蛋白，其序列如SEQIDNO.1所示。PmEIL蛋白参与梅花响应季节性气候变化，在真梅和杏梅品系中受温度、日照等季节性气候变化的调控方式存在明显差异，可用于鉴定真梅/杏梅品系，实现在梅花的幼苗期快速、准确地鉴定梅花品系，缩短了育种周期，极大地减少了育种工作量。本发明还提供与PmEIL基因相关且与梅花茎色相关的SNP分子标记，为梅花茎色性状的鉴定和真梅/杏梅品系的鉴定提供了基础和分子工具。CN110698550ACN110698550A权利要求书1/2页1.梅花PmEIL蛋白，其特征在于，其具有如下(1)～(3)任意一种氨基酸序列：(1)如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；(2)如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的缺失、替换和插入得到的具有相同功能蛋白的氨基酸序列；(3)与如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列具有至少90％同源性且得到相同功能蛋白的氨基酸序列。2.编码权利要求1所述的梅花PmEIL蛋白的基因。3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于，其具有如下(1)～(3)任意一种核苷酸序列：(1)如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列；(2)如SEQIDNO.2所述的核苷酸序列经一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入得到的编码相同功能蛋白的核苷酸序列；(3)在严格条件下能够与如(1)或(2)所述的核苷酸序列杂交并编码相同功能蛋白的核苷酸序列。4.包含权利要求2或3所述的基因的生物材料，其特征在于，所述生物材料包括表达盒、载体、宿主细胞、工程菌或转基因植物细胞系。5.权利要求2或3所述的基因的特异性扩增引物，其特征在于，其具有如SEQIDNO.3-4所示的序列或具有如SEQIDNO.5-6所示的序列。6.与梅花茎色相关的SNP分子标记，其特征在于，其为位于梅花1号染色体的16248370bp～16251843bp区间内的如下(1)、(2)中的SNP分子标记中的任意一个或两个的组合：(1)位于梅花第1号染色体第16248370bp处，多态性为T/C；(2)位于梅花第1号染色体第16251843bp处，多态性为A/G。7.权利要求6所述的SNP分子标记的检测引物，其特征在于，其具有如SEQIDNO.9-12所示的序列。8.权利要求2或3所述的基因或权利要求4所述的生物材料的如下任一种应用：(1)在调控梅花茎色、落叶性状或响应季节性气候变化性状中的应用；(2)在梅花遗传育种中的应用。9.权利要求2或3所述的基因或权利要求5所述的特异性扩增引物或权利要求6所述的SNP分子标记或权利要求7所述的检测引物的如下任一种应用：(1)在杏梅/真梅梅花品系鉴定中的应用；(2)在杏梅杂交子代幼苗期鉴定中的应用；(3)在梅花茎色、落叶性状或响应季节性气候变化性状鉴定中的应用。10.一种真梅/杏梅品系鉴定方法，其特征在于，所述鉴定方法包括：将待测梅花在不同季节性气候条件下进行培养，提取待测梅花的RNA，分析在不同季节性气候条件下培养的待测梅花中PmEIL基因的差异表达情况，判断待测梅花的品系；或者，所述鉴定方法包括：以待测梅花的基因组为模板，采用权利要求7所述的SNP分子标记的检测引物进行PCR扩增，分析PCR扩增产物的序列，判断所述待测梅花的基因型；所述PmEIL基因的编码蛋白具有如下(1)～(3)任意一种氨基酸序列：2CN110698550A权利要求书2/2页(1)如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；(2)如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列经一个或多个氨基酸的缺失、替换和插入得到的具有相同功能蛋白的氨基酸序列；(3)与如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列具有至少90％同源性且得到相同功能蛋白的氨基酸序列。3CN110698550A说明书1/7页一种快速鉴定真梅/杏梅品系的分子检测方法技术领域[0001]本发明涉及植物基因工程与分子生物