一种血清载脂蛋白B测定试剂盒及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111426845A(43)申请公布日2020.07.17(21)申请号202010264565.6(22)申请日2020.04.07(71)申请人中拓生物有限公司地址276000山东省临沂市罗庄区创新大厦A座申请人山东中拓医学检验有限公司中科梅奥（山东）医学检验有限公司(72)发明人刘安娜(74)专利代理机构济南泉城专利商标事务所37218代理人王翠翠(51)Int.Cl.G01N33/68(2006.01)G01N33/543(2006.01)G01N33/545(2006.01)权利要求书2页说明书12页附图1页(54)发明名称一种血清载脂蛋白B测定试剂盒及其制备方法和应用(57)摘要本发明提供一种载脂蛋白B（ApoB）测定试剂盒，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液、NaCl、盐酸胍、癸基硫酸钠、四甲基脲、聚乙二醇6000、表面活性剂、防腐剂。试剂R2：4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)缓冲液、羊抗人ApoB抗体包被胶乳颗粒、表面活性剂、稳定剂、防腐剂。本发明同时提供了该试剂盒的制备方法和应用，该试剂盒多种成分互相协同有助于脂蛋白中抗原位点的暴露，促进抗原抗体反应，是一种稳定性强，灵敏度高，重复性好，成本低的液体试剂盒。CN111426845ACN111426845A权利要求书1/2页1.一种载脂蛋白B测定试剂盒，其特征在于，试剂盒含有试剂R1和试剂R2；试剂R1中含有以下成分：缓冲液20-80mmol/L；NaCl9g/L；聚乙二醇600010g/L；盐酸胍0.3mmol/L；癸基硫酸钠0.3mmol/L；四甲基脲0.3mmol/L；表面活性剂0.1%-2%；防腐剂0.5-1g/L；试剂R2中含有以下成分：缓冲液20-80mmol/L；羊抗人ApoB抗体包被胶乳颗粒20-60mg/L；聚乙二醇600010g/L；稳定剂10-40g/L；表面活性剂0.1%-2%；防腐剂0.5-1g/L；其中所述百分比为体积比。2.根据权利要求1所述的载脂蛋白B测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和试剂R2的缓冲液体系为4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液、N-氨基甲酰甲基乙磺酸缓冲液、磷酸盐缓冲液或2-(N-吗啉代)乙磺酸缓冲液中的一种。3.根据权利要求1所述的载脂蛋白B测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1的pH为6.5-7.5，试剂R2的pH为6.5-7.0。4.根据权利要求1所述的载脂蛋白B测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和R2试剂中的表面活性剂选自吐温-20、曲拉通x-100和聚氧乙烯烷基醚EMULGEN709中的一种或两种。5.根据权利要求1所述的载脂蛋白B测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R2试剂中的稳定剂为牛血清白蛋白、明胶、海藻糖和丙三醇中的一种或多种。6.根据权利要求1所述的载脂蛋白B测定试剂盒，其特征在于，所述试剂R1和R2试剂中的防腐剂为叠氮钠、proclin300、MIT和苯甲酸钠中的一种或多种。7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂R1与试剂R2的体积比为1～5:1，优选地，体积比为3:1。8.一种权利要求1-7之一所述的载脂蛋白B测定试剂盒的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：先制成羊抗人载脂蛋白B抗体包被胶乳颗粒的制备方法：取粒径100nm表面羧基化的聚苯乙烯胶乳颗粒，加入到10ml缓冲液中，使胶乳颗粒终浓度为1.0%；然后加入羊抗人载脂蛋白B抗体、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐及N-羟基丁二酰亚胺，室温下混合搅拌3小时，加入1ml10g/L的BSA溶液，12000rpm离心40分钟，去除上清，所得沉淀即为羊抗人载脂蛋白B抗体包被胶乳颗粒；再按照比例加入其它物质溶解，制成载脂蛋白B测定试剂盒。2CN111426845A权利要求书2/2页9.一种权利要求1-7之一所述的载脂蛋白B测定试剂盒的应用，用于非疾病的诊断和治疗目的测定血清中载脂蛋白B的浓度。3CN111426845A说明书1/12页一种血清载脂蛋白B测定试剂盒及其制备方法和应用技术领域[0001]本发明涉及生化试剂测定技术领域，特别涉及一种载脂蛋白B测定试剂盒，还涉及所述载脂蛋白B测定试剂盒制备方法和应用。背景技术[0002]载脂蛋白是血浆脂蛋白中的蛋白质部分，能够结合和运输血脂到机体各组织进行代谢及利用的蛋白质。大量研究发现载脂蛋白基因发生突变，形成不同等位基因型多态性，并进一步形成不同表型的载脂蛋白，可影响血脂代谢和利用，从而影响高脂血症、动脉粥样硬化、心脑血管疾病等的发生和发展。[0003]载脂蛋白B(apolipoprotei