多囊泡型二氢杨梅素脂质体的制备方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111991353A(43)申请公布日2020.11.27(21)申请号202010957443.5G01N1/38(2006.01)(22)申请日2020.09.13G01N1/34(2006.01)A61P31/04(2006.01)(71)申请人仲恺农业工程学院A61K127/00(2006.01)地址510000广东省广州市海珠区纺织路A61K135/00(2006.01)东沙街24号(72)发明人舒绪刚田允波罗帆黄运茂吴紫倩杨远廷胡洪超(74)专利代理机构广州厚海专利商标代理事务所(普通合伙)44662代理人梁桂萍(51)Int.Cl.A61K9/127(2006.01)A61K31/353(2006.01)A61K36/87(2006.01)G01N21/33(2006.01)权利要求书2页说明书9页附图7页(54)发明名称多囊泡型二氢杨梅素脂质体的制备方法及应用(57)摘要本发明涉及一种二氢杨梅素技术领域，尤指一种多囊泡型二氢杨梅素脂质体的制备方法及应用，制备方法包括：1)采集藤茶茎叶制得藤茶粉末，通过水浴、浓缩、过滤及冷却后获得二氢杨梅素提纯物；2)称取提纯物溶解以获得二氢杨梅素溶液，并检测纯度；3)采用吐温80、PEG‑4000制备水相溶液，采用二氢杨梅素、胆固醇和蛋黄卵磷脂制备油相溶液；将油相溶液滴加至水相溶液中，制得多囊泡型二氢杨梅素脂质体；4)取多囊泡型二氢杨梅素脂质体溶液离心后取上清液，然后进行吸光度的检测；本发明提取二氢杨梅素，以蛋黄卵磷脂为脂质体模板，聚乙二醇4000为修饰壁材制备多囊泡型二氢杨梅素脂质体，从而解决二氢杨梅素水解度低、生物半衰期短、膜通透力差等问题。CN111991353ACN111991353A权利要求书1/2页1.一种多囊泡型二氢杨梅素脂质体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：1)二氢杨梅素提取：采集藤茶茎叶制得藤茶粉末，并进行pH调节，通过水浴、浓缩、过滤及冷却后获得二氢杨梅素提纯物；2)二氢杨梅素纯度检测：称取二氢杨梅素提纯物置于定容瓶中，采用95％的乙醇溶解，以获得二氢杨梅素溶液，测量二氢杨梅素溶液的吸光度，通过吸光度判断纯度；3)制备多囊泡型二氢杨梅素脂质体：采用吐温80、PEG-4000制备水相溶液，采用二氢杨梅素、胆固醇和蛋黄卵磷脂制备油相溶液；然后将油相溶液滴加至水相溶液中，处理后得多囊泡型二氢杨梅素脂质体；4)多囊泡型二氢杨梅素脂质体检测：取多囊泡型二氢杨梅素脂质体溶液离心后取上清液，然后进行吸光度的检测。2.根据权利要求1所述的一种多囊泡型二氢杨梅素脂质体的制备方法，其特征在于，步骤1)具体包括以下步骤：1-1)采集藤茶茎叶并进行烘干、粉碎、过筛处理得到藤茶粉末，封装备用；1-2)称取20～60g藤茶粉末并溶于去离子水中，采用NaOH溶液调节溶液至pH＝5；1-3)置于90～100℃水浴提取至少0.5h，趁热过滤弃滤渣，得提取液；1-4)将提取液旋蒸浓缩至50～90mL，放置于冰箱内进行冷藏保存，保存23～25h后过滤，弃滤液，得二氢杨梅素粗提取物；1-5)将二氢杨梅素粗提取物溶于无水乙醇中，过滤后弃滤渣，并将溶液置于鼓风烘干并保存以除去溶剂，得二氢杨梅素固体样品；1-6)将二氢杨梅素固体样品溶于热水中，趁热过滤，弃滤渣，待溶液自然冷却析出结晶后，即得到二氢杨梅素提纯物。3.根据权利要求1所述的一种多囊泡型二氢杨梅素脂质体的制备方法，其特征在于，所述的步骤2)中，二氢杨梅素提纯物的称取量为0.01～0.05g，定容瓶体积为100mL，定容至100mL；测量吸光度时，采用紫外分光光度计测量二氢杨梅素溶液的吸光度，在λ＝293nm处测量二氢杨梅素溶液的吸光度，二氢杨梅素溶液的标准浓度(C)与吸光度(A)线性方程为A＝48.3085C-0.00829；R2＝0.9988。4.根据权利要求1所述的一种多囊泡型二氢杨梅素脂质体的制备方法，其特征在于，所述的步骤3)具体包括以下步骤：3-1)吸取40～200μL吐温80和0.02～0.1gPEG-4000并溶于40mLPH＝6.5的磷酸缓冲溶液中，得到水相溶液；3-2)取0.04～0.2g二氢杨梅素、0.05～0.3g胆固醇和0.3～0.7g蛋黄卵磷脂并溶于无水乙醇中，搅拌使其充分溶解以得到油相溶液；3-3)在磁力搅拌机转动作用下，使用注射器吸取油相溶液并逐渐滴加入水相溶液中；3-4)滴定完成后，将混合溶液置于水浴锅中轻微搅拌3～4h以除去乳浊液中的无水乙醇；待溶液保持恒定体积后，得多囊泡型二氢杨梅素脂质体。5.根据权利要求1所述的一种多囊泡型二氢杨梅素脂质体的制备方法，其特征在于，所述的步骤4)具体包括以下步骤：4-1)吸取5～1