一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109055294A(43)申请公布日2018.12.21(21)申请号201811077979.7(22)申请日2018.09.16(71)申请人苏州怡彼得生物技术有限公司地址215002江苏省苏州市苏州相城经济技术开发区观塘路1号西交大漕湖科技园C幢1016(72)发明人谢同张建军(51)Int.Cl.C12N5/00(2006.01)C08F220/18(2006.01)C08F230/02(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图2页(54)发明名称一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体及其制备方法(57)摘要本发明提供了一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体及其制备方法。本发明的微载体以魔芋葡甘聚糖微球为基质，用生物仿生新材料人造细胞膜覆层微球。本发明的微载体的制备方法如下：将基质微球分别用石油醚和无水乙醇洗涤后，烘干备用；将2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱(MPC)与甲基丙烯酸正丁酯溶解于乙醇，在引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)的作用下聚合成为人造细胞膜材料，将其稀释到2%浓度后备用；将洗涤好的魔芋葡甘聚糖微球加入到人造细胞膜乙醇溶液中浸泡后，在真空下用旋转蒸发仪干燥后即得微载体产品。该微载体表面人造细胞膜材料覆盖均匀，连接牢固，具有无毒性、细胞贴壁好、可降解、细胞容易洗脱不粘连等优点，且制成的微载体成本低廉，生产过程简单，周期较短，有利于工业化生产。CN109055294ACN109055294A权利要求书1/1页1.一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体，其特征在于：用于涂覆层的人造细胞膜材料为2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱(MPC)与甲基丙烯酸正丁酯合成的高分子仿生新材料。2.一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体，其特征在于：所述微载体的基质为魔芋葡甘聚糖微球，人造细胞膜覆层质量为基质微球质量的3%-5%,覆层的人造细胞膜通过真空干燥老化涂覆于基质微球表面。3.一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤，1）将魔芋葡甘聚糖微球加入到石油醚中，搅拌洗涤，过滤后再加入到乙醇中，搅拌洗涤，过滤烘干后备用；2）将2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱(MPC)与2-5倍摩尔当量的甲基丙烯酸正丁酯溶解于乙醇中，加入引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)，其重量为上面两个原料重量和的0.5%，后回流24小时，冷却后倒入剧烈搅拌的丙酮中沉淀，过滤去除未反应的原料和小分子杂质，真空干燥后用乙醇稀释到2%浓度备用；3）按照人造细胞膜重量为魔芋葡甘聚糖微球重量的3-5%的比例将步骤1）洗好的魔芋葡甘聚糖微球加入到步骤2）已稀释到2%浓度的人造细胞膜乙醇溶液中，用旋转蒸发仪在35-40℃下真空干燥到流动性良好，然后在旋转蒸发仪中旋转下，打开紫外灯照射24小时后包装。4.根据权利要求3所述的一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体的制备方法，其特征在于：步骤2）中，所述甲基丙烯酸正丁酯的摩尔量为2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱(MPC)的2-5倍；优选的，所述甲基丙烯酸正丁酯的摩尔量为2-甲基丙烯酰氧乙基磷酸胆碱(MPC)的3倍。5.根据权利要求3所述的一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体的制备方法，其特征在于：步骤2）中，所述人造细胞膜重量为魔芋葡甘聚糖微球重量的3-5%；优选的，所述人造细胞膜重量为魔芋葡甘聚糖微球重量的4%。6.根据权利要求3所述的一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体的制备方法，其特征在于：步骤2）中微载体是旋转蒸发仪上旋转时，以紫外灯照射24小时消毒。2CN109055294A说明书1/4页一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体及其制备方法技术领域[0001]本发明属于生物材料的组织工程技术领域，尤其涉及一种细胞培养用人造细胞膜覆层微载体及其制备方法。[0002]背景技术[0003]微载体培养技术是目前公认的最有发展前途的一种用于动物细胞大规模培养的技术。1967年VanWezel首次将微载体用于动物细胞培养以来，微载体培养技术已发展成为目前贴壁依赖性细胞规模化培养的主要方法。微载体具有比表面积大、培养基利用率高和细胞收集过程简单等优点，广泛用于多种细胞的培养和疫苗、抗体、核酸等生物制品的生产，并在组织工程和再生医学领域具有一定的应用前景。至今国际市场上出售的微载体商品类型已达十几种，其中常用的商品化微载体有三种:Cytodex1,2,3,Cytopore和Cytoline，目前最常使用的是Cytodexl,2,3型微载体。[0004]魔芋葡甘聚糖(KGM)是一种天然高分子多糖，具有良好的生物相容性和无毒性等，KGM微球透明度高，机械性能好且密度适宜是一种潜在的微载体基质，目前国内研究报道比较多，众多文献和专利对合成方法进行了介绍，如：CN201210523