铁线莲奶油的组织培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103430854A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103430854103430854A(43)申请公布日2013.12.11(21)申请号201310428128.3(22)申请日2013.09.22(71)申请人南京林业大学地址211225江苏省南京市溧水县白马镇国家农业科技园南京林业大学白马基地(72)发明人方炎明程莹刘畅王磊(74)专利代理机构南京君陶专利商标代理有限公司32215代理人沈根水(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页权利要求书2页说明书3页说明书3页(54)发明名称铁线莲奶油的组织培养方法(57)摘要本发明是一种铁线莲栽培品种“奶油”的组织培养方法，包括如下步骤：1）外植体消毒处理；2）芽诱导和芽增殖，包括①诱导培养；②不定芽增殖培养；③壮苗培养；④生根培养；⑤炼苗和移栽。本发明的有益效果：应用组织培养方法，能较好地保持母本的观赏价值，有效地提高铁线莲“奶油”的繁殖系数；与扦插繁殖相比，生长周期大幅缩短，组织培养法的繁殖系数为扦插繁殖的50~60倍；快速繁殖、品种优质、产量可观和便于实地推广。CN103430854ACN103485ACN103430854A权利要求书1/2页1.一种铁线莲栽培品种Clematis‘Proteus’的组织培养方法，其特征是包括如下步骤：1）外植体消毒处理；2）芽诱导和芽增殖。2.根据权利要求1所述的一种铁线莲栽培品种Clematis‘Proteus’的组织培养方法，其特征是所述的步骤1）外植体消毒处理，具体包括：取铁线莲“奶油”当年生的幼嫩茎节和顶芽，依次用自来水冲洗1h，毛笔来回刷洗20次，于超净工作台上用质量浓度为75%乙醇灭菌20s，无菌水冲洗2次，之后用质量浓度为0.1%氯化汞灭菌7min，立即用无菌水冲洗4次；用灭菌滤纸吸干外植体表面水分，切除叶柄和两端受伤部位；实验统计的污染率分别为70%、64%，褐化率为25%、22%。3.根据权利要求1所述的一种铁线莲栽培品种Clematis‘Proteus’的组织培养方法，其特征是所述的步骤2）芽诱导和芽增殖，具体包括：①诱导培养将芽接种于已灭菌的诱导培养基1/2MS+生长调节物质NAA0.5mg/L+生长调节物质TDZ1.0mg/L+质量浓度为3%的蔗糖20~30g/L+质量浓度为0.7%的琼脂7g/L，pH值为5.8，培养4周；培养温度25℃，光照16h/d，照度24001x；②不定芽增殖培养将诱导的丛生芽分成单芽，继而将单芽接入1/2MS+生长调节物质6-BA0.2mg/L+生长调节物质KT0.5mg/L+生长调节物质NAA0.05mg/L+质量浓度为3%的蔗糖20~30g/L+质量浓度为0.7%的琼脂7g/L的培养基，pH值为5.8，培养4周；温度、光照条件同①丛生芽诱导；③壮苗培养将增殖培养基中叶色浓绿、长度为1~2cm的不定芽逐个切下，接入MS基本培养基中培养4星期，光照条件同①丛生芽诱导；④生根培养将壮苗培养后长势旺盛的芽接入生根培养基1/2MS+生长调节物质IBA0.5mg/L中，培养40天；温度、光照条件同①丛生芽诱导；⑤炼苗和移栽将生根的铁线莲“Clematis‘Proteus’”植株的培养瓶瓶盖打开，温室下炼苗6d后，取出试管苗，洗净，移栽到准备好的珍珠岩：蛭石：泥炭(1:1:1)的营养钵中，保持湿度85%~95%，温度、光照条件同(2)丛生芽诱导，成活率达95%。4.根据权利要求3所述的一种铁线莲栽培品种Clematis‘Proteus’的组织培养方法，其特征是所述的MS基本培养基是由大量元素、微量元素、铁盐和有机成分所组成。5.根据权利要求4所述的一种铁线莲栽培品种Clematis‘BettyRisdon’的组织培养-1-1方法，其特征是所述的大量元素为：硝酸钾KNO3，1900mg·L,硝酸铵NH4NO3，1650mg·L,-1-1磷酸二氢钾KH2PO4，170mg·L,硫酸镁MgSO4·7H2O，370mg·L,氯化钙CaCl2·4H2O，440mg·L-1；-1-1所述的微量元素为：碘化钾KI，0.83mg·L,硼酸H3BO3，6.2mg·L，或硫酸锰-1-1MnSO4·4H2O,22.3mg·L或硫酸锌ZnSO4·7H2O，8.6mg·L或钼酸钠Na2MoO4·2H2O，2CN103430854A权利要求书2/2页-1-1-10.25mg·L,硫酸铜CuSO4·5H2O，0.025mg·L,氯化钴CoCl2·6H2O，0.025mg·L；-1所述的铁盐为：乙二胺二乙酸二钠Na2·EDTA，37.3mg·L,硫酸亚铁FeSO4·7H2O，27.8mg·L-1；-1-1所述的有机成分为