一种圆锥铁线莲的组织培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109618927A(43)申请公布日2019.04.16(21)申请号201811567715.X(22)申请日2018.12.21(71)申请人滁州学院地址239000安徽省滁州市会峰西路1号(72)发明人盛璐马玉华王伟魏树强(74)专利代理机构合肥国和专利代理事务所(普通合伙)34131代理人孙永刚(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页附图3页(54)发明名称一种圆锥铁线莲的组织培养方法(57)摘要本发明提供一种圆锥铁线莲的组织培养方法，以当年生枝条带芽茎段为外植体建立圆锥铁线莲再生体系，具体包括以下步骤：(1)取材时间：春季4月份左右，出芽率达到了92.7％；(2)外植体的选择与灭菌：选用幼嫩茎段为外植体，表面灭菌以0.1％HgCl2，灭菌5min为宜；(3)诱导培养：培养基为MS+0.6mg/L6-BA+0.15mg/LIBA，30g/L蔗糖，5.8g/L琼脂，pH5.8；(4)增殖培养：腋芽增殖的较适培养基MS+0.3mg/LKT+0.05mg/LNAA+30.0g/Lsucrose，增殖系数为4.16；(5)生根培养：适宜的生根培养基是1/2MS+0.05mg/LNAA；(6)瓶苗移栽：瓶苗移栽春季最佳，经过5-7天的开瓶炼苗，以营养土：珍珠岩：蛭石＝1：1：2为基质。本发明成功的建立圆锥铁线莲的组织快繁体系，可以快速繁殖大量幼苗，为圆锥铁线莲的大规模应用推广提供了基础。CN109618927ACN109618927A权利要求书1/1页1.一种圆锥铁线莲的组织培养方法，其特征在于，利用圆锥铁线莲的当年生枝条为外植体，包括以下步骤：(1)取材；(2)外植体的选择与灭菌；(3)诱导培养：将消毒后的外植体接种到培养基中诱导培养；(4)增殖培养：将无菌芽苗接种于添加增殖培养基中增殖培养；(5)生根培养:将无菌芽苗切下后接种在生根培养基中；(6)瓶苗移栽。2.如权利要求1所述的一种圆锥铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(2)外植体的选择与灭菌包括以下步骤：(2.1)采取具有优良性状，饱满而未萌发的腋芽当年生健壮幼枝枝条，保留茎段；(2.2)去除外植体上的绒毛，用洗衣粉水浸泡后，在流水下冲洗；(2.3)在无菌条件下，材料用酒精浸泡，再经升汞分别处理，然后用无菌水冲洗多次。3.如权利要求2所述的一种圆锥铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(2.2)中用洗衣粉水浸泡15min后，在流水下冲洗1-2h。4.如权利要求2所述的一种圆锥铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(2.3)中将材料放入灭菌过的三角瓶中，用75％酒精浸泡30s，再经0.1％升汞分别处理5min，然后用无菌水冲洗6～8次，每次2～3min。5.如权利要求1所述的一种圆锥铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(3)中诱导培养条件为：25℃光照下培养，以改良1/2MS，1/2MS，MS，WPM、B5为基本培养基，添加低浓度植物生产激素、蔗糖、琼脂培养基。6.如权利要求5所述的一种圆锥铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述蔗糖添加量为30g/L，琼脂培养基添加量为5.8g/L上。7.如权利要求1所述的一种圆锥铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(4)中将带芽茎段初代培养腋芽分化出的无菌芽苗接种于增殖培养基中，pH5.8，25℃光照下培养。8.如权利要求1所述的一种圆锥铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(5)将具有1-2对新生叶片的无菌芽苗切下后接种在生根培养基中，25℃光照下培养30d。9.如权利要求1所述的一种圆锥铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(6)的具体操作为:将生根苗取出，洗净幼苗根系，采用生理胁迫的方法，移栽到基质中。10.如权利要求1所述的一种圆锥铁线莲的组织培养方法，其特征在于，所述基质采用以下配比原料制成，营养土：珍珠岩：蛭石＝1:1:2。2CN109618927A说明书1/6页一种圆锥铁线莲的组织培养方法技术领域[0001]本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及圆锥铁线莲的组织培养方法。背景技术[0002]铁线莲属(ClematisL.)为毛茛科(Ranunculaceae)，是一种观赏价值高、抗逆性强的藤本植物，全球约有230-355种，广泛分布于全球各大洲(南极洲除外)，每种植物的性状特征、用途不尽相同。铁线莲属植物大多数为多年生木质或草质藤本，少数为直立灌木或草本。各种铁线莲花期不同，四季均有花开，多数为6-8月。该属植物花型新颖独特，颜色丰富，花期较长，具有较强的耐寒、耐贫瘠性。因其观赏价值高，用途十分广泛。由于铁线莲属植物的攀岩性较好，可以作为垂直绿化材料，应用于围墙、栅栏、