一种雪莲离体培育方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN106069766A(43)申请公布日2016.11.09(21)申请号201610493766.7(22)申请日2016.06.29(71)申请人无锡南理工科技发展有限公司地址214192江苏省无锡市锡山区芙蓉中三路99号瑞云六座三楼(72)发明人许建中孟剑华安剑石(74)专利代理机构北京众合诚成知识产权代理有限公司11246代理人龚燮英(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书2页说明书5页(54)发明名称一种雪莲离体培育方法(57)摘要本发明公开一种雪莲离体培育方法，采用雪莲的花托外植体诱导培养，先用蓝光照射再用荧光照射，二者的结合大大缩短了愈伤组织的愈伤分化时间，提高了愈伤组织的形成数量与效率。本发明经离体培养得到的雪莲幼苗，缩短培育周期，保持雪莲基因的典型性，具有在雪莲人工栽培领域的应用前景。CN106069766ACN106069766A权利要求书1/2页1.一种雪莲离体培育方法，其特征在于：具体步骤如下：(1)花托外植体预处理：选取雪莲的花蕾，在4℃环境中冷藏3～5天后，将花蕾取出自然恢复至室温，剥去苞片和小花，用纯净水冲洗，先在0.05％的升汞水溶液中消毒5～8min，再用70％的酒精消毒20～40s，之后用无菌水冲洗3次，即得到雪莲花托外植体；以上涉及的百分比均为体积百分比；(2)外植体接种及诱导培养：将雪莲花托外植体移入到灭菌后的第一培养基中，将温度设定为23±1℃，以蓝光灯为光源，光照强度控制为400～800Lx，光周期控制为光14h/暗10h，每十天更换一次培养基，直到诱导出愈伤组织；(3)转移诱导培养：将步骤(2)得到的愈伤组织转移到第二培养基，温度为27±1℃，以荧光灯为光源，光照强度控制为1800～2500Lx，光周期控制为光14h/暗10h，愈伤组织诱导出嫩芽后，将嫩芽从雪莲花托外植体上完整地切下，转移到第三培养基内继续以相同的条件培养至形成雪莲幼苗；(4)幼苗的驯化与炼苗：将雪莲幼苗移栽到炼苗基质中，并逐步转移到外部环境中，在幼苗适应外部环境正常生长后，再移栽至普通土壤中正常培养。2.根据权利要求1所述的一种雪莲离体培育方法，其特征在于：步骤(2)所述第一培养基的组成成分为：KNO3800～1300mg/L，2-氨基-5-羧基戊酰胺800～1200mg/L，KH2PO4300～450mg/L，CaCl2·2H2O320～350mg/L，MgSO4·7H2O180～240mg/L，EDTA120～180mg/L，FeSO4·7H2O30～50mg/L，MnSO4·4H2O50～80mg/L，ZnSO4·7H2O15～30mg/L，H3BO38～10mg/L，KI5～10mg/L，Na2MoO4·2H2O1～5mg/L，CoCl2·6H2O0.2～0.5mg/L，4-碘苯氧乙酸0.15～0.20mg/L，肌醇30～80mg/L，甘氨酸0.5～1.0mg/L，维生素B10.5～0.75mg/L，维生素B61.0～1.5mg/L，烟酸1.0～1.5mg/L，蔗糖30～50g/L，琼脂10～15g/L，激动素KT0.5～1.0mg/L，萘乙酸NAA0.3～0.4mg/L，山梨醇50～70g/L，生物素0.15～0.20mg/L，盐酸吡哆醇0.5～1.0mg/L，盐酸硫胺素0.5～1.0mg/L，甲基亚硝基脲1.5～2.0mg/L，吲哚丁酸1.5～2.0mg/L，丙氨酸5～10mg/L，叶酸5～10mg/L，调环酸钙1.5～2.0mg/L，秋水仙碱1.5～2.0mg/L，水解蛋白2.0～2.5g/L。3.根据权利要求1或2所述的一种雪莲离体培育方法，其特征在于：所述第二培养基的组成成分在步骤(2)所述第一培养基基础上添加了吲哚丁酸0.5～2.0mg/L和2,4-二氯苯氧乙酸丁酯1.5～2.0mg/L；所述第三培养基的组成成分在所述第二培养基基础上添加了6-苄氨基嘌呤1.5～2.0mg/L。4.根据权利要求1所述的一种雪莲离体培育方法，其特征在于：步骤(4)所述逐步转移到外部环境中的方法为：将雪莲幼苗移栽到炼苗基质后，从诱导环境中逐天降低温度并逐天增加光照强度，至与外部环境相同时，再培养2～3天即可移栽至普通土壤中，转移过程的周期根据室外环境不同而调节，转移过程的周期持续10～15天。5.根据权利要求1所述的一种雪莲离体培育方法，其特征在于：步骤(4)所述炼苗基质2CN106069766A权利要求书2/2页的组成成分为：珍珠岩、蛭石、锯末、松树皮、水苔、花泥、泥炭土以及钙镁磷钾肥。6.根据权利要求5所述的一种雪莲离体培育方法，其特征在于：所述炼苗基质中，珍珠岩、蛭石、锯末、松树皮、水苔、花泥、泥炭土、钙镁磷