一种适用于睡莲的流式细胞术样品的制备方法及细胞裂解缓冲液.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107603883A(43)申请公布日2018.01.19(21)申请号201710864866.0(22)申请日2017.09.22(71)申请人上海市农业科学院地址201100上海市闵行区北翟路2901号(72)发明人蒋玮唐雪明吕贝贝吴潇(74)专利代理机构北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371代理人李佳(51)Int.Cl.C12N1/06(2006.01)G01N1/30(2006.01)G01N15/14(2006.01)权利要求书1页说明书7页附图3页(54)发明名称一种适用于睡莲的流式细胞术样品的制备方法及细胞裂解缓冲液(57)摘要本发明公开了一种适用于睡莲的流式细胞术样品的制备方法及细胞裂解缓冲液，涉及流式细胞术检测领域。本发明公开的适用于睡莲的流式细胞术样品的制备方法，包括裂解步骤：将睡莲组织样品进行裂解处理、过滤处理、离心处理，得到待染色的细胞核；染色步骤：对所述待染色的细胞核进行染色处理，得到染色的细胞核。该制备方法采用改进的细胞裂解缓冲液处理睡莲组织样品，其能够去除睡莲完整的细胞核中残留的细胞质碎片，保持细胞核在悬浮液中的稳定并阻止凝集，保护DNA不被降解，并提供合适的环境用来进行专一的核DNA化学染色，有效地降低胞质成分对染色的负面影响。CN107603883ACN107603883A权利要求书1/1页1.一种适用于睡莲的流式细胞术样品制备方法，其特征在于，其包括：裂解步骤：将睡莲组织样品进行裂解处理、过滤处理、离心处理，得到待染色的细胞核；染色步骤：对所述待染色的细胞核进行染色处理，得到染色的细胞核。2.根据权利要求1所述适用于睡莲的流式细胞术样品制备方法，其特征在于，所述睡莲选自印度红睡莲、埃及蓝睡莲、埃及白睡莲、香睡莲和黄乔伊睡莲中的任意一种。3.根据权利要求1或2所述的适用于睡莲的流式细胞术样品制备方法，其特征在于，所述睡莲组织样品为睡莲叶片。4.根据权利要求1或2所述的适用于睡莲的流式细胞术样品制备方法，其特征在于，所述裂解步骤的裂解处理中，采用的细胞裂解缓冲液包括如下组分：0.1-0.2mol/LTris-HCl，5-15mmol/L氯化镁，1-3mmol/L乙二胺四乙酸二钠，70-90mmol/L氯化钠，10-20mmol/L焦亚硫酸钠，1.5-3.0％(w/v)聚乙烯吡咯烷酮，0.5-1％(V/V)聚乙二醇辛基苯基醚，4-6mmol/L二硫苏糖醇；pH值为7.4-7.6。5.根据权利要求4所述的适用于睡莲的流式细胞术样品制备方法，其特征在于，所述细胞裂解缓冲液包括如下组分：0.2mol/LTris-HCl，10mmol/L氯化镁，2mmol/L乙二胺四乙酸二钠，80mmol/L氯化钠，10mmol/L焦亚硫酸钠，2％(w/v)聚乙烯吡咯烷酮，1％(V/V)聚乙二醇辛基苯基醚，5mmol/L二硫苏糖醇；pH值为7.5。6.根据权利要求1或2所述的适用于睡莲的流式细胞术样品制备方法，其特征在于，所述裂解步骤的离心处理中，转速为500-2000r/min，温度为4℃，时间为3-10分钟。7.根据权利要求6所述的适用于睡莲的流式细胞术样品制备方法，其特征在于，所述裂解步骤的离心处理中，转速为1000r/min，温度为4℃，时间为5分钟。8.根据权利要求1或2所述适用于睡莲的流式细胞术样品制备方法，其特征在于：所述染色步骤的染色处理中，采用的染色液包括如下组分：50μg/ml的RnaseA和50μg/ml的碘化丙啶。9.根据权利要求1或2所述适用于睡莲的流式细胞术样品制备方法，其特征在于：所述染色步骤的染色处理中，将所述待染色的细胞核中加入染色液后混匀，在于4℃黑暗处放置5-30分钟。10.一种用于制备睡莲流式细胞术样品的细胞裂解缓冲液，其特征在于，其包括如下组分：0.1-0.2mol/LTris-HCl，5-15mmol/L氯化镁，1-3mmol/L乙二胺四乙酸二钠，70-90mmol/L氯化钠，10-20mmol/L焦亚硫酸钠，1.5-3.0％(w/v)聚乙烯吡咯烷酮，0.5-1％(V/V)聚乙二醇辛基苯基醚，4-6mmol/L二硫苏糖醇；pH值为7.4-7.6。2CN107603883A说明书1/7页一种适用于睡莲的流式细胞术样品的制备方法及细胞裂解缓冲液技术领域[0001]本发明涉及流式细胞术检测领域，具体而言，涉及一种适用于睡莲的流式细胞术样品的制备方法及细胞裂解缓冲液。背景技术[0002]睡莲科(Nymphaeaceae)睡莲属(Nymphaea)植物为多年生宿根草本植物，其花和叶浮于水面，花色艳丽，姿态优美，具有很高的观赏价值，同时由于因其能够吸收水中的有毒物质，在水体净化中有着十分重要的作