一种红花木莲外植体消毒方法、外植体及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN108094202A(43)申请公布日2018.06.01(21)申请号201711384456.2(22)申请日2017.12.20(71)申请人铜仁学院地址554300贵州省铜仁市碧江区川硐教育园区启航路238号(72)发明人高宇琼郭春喜张福星田鹏付素静(74)专利代理机构北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)11371代理人许洪洁(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书6页(54)发明名称一种红花木莲外植体消毒方法、外植体及其应用(57)摘要本发明涉及一种红花木莲外植体消毒方法、外植体及其应用。所述消毒方法包括：使用质量分数为0.1～0.3％的HgCl2溶液对经过预处理的外植体进行消毒，消毒时间为8～10min。本发明所述方法不但杀灭红花木莲外植体表面细菌的效果好，外植体污染率低，同时还兼顾保持外植体的活力，使外植体的杀伤率维持在较低水平，从而在整体上提高外植体的存活率。CN108094202ACN108094202A权利要求书1/1页1.一种对红花木莲外植体进行消毒的方法，其特征在于，所述方法包括：使用质量分数为0.1～0.3％的HgCl2溶液对经过预处理的外植体进行消毒，消毒时间为8～10min。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒的具体方式包括：(1)使用乙醇溶液浸润外植体；(2)使用无菌水洗涤所述外植体；(3)使用HgCl2溶液浸润所述外植体，之后，使用无菌水洗涤并去除表面水分，置于无菌条件下备用，即得经过消毒的外植体。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述乙醇溶液为体积分数为60～95％的乙醇溶液，优选为体积分数为75％的乙醇溶液，浸润时间为1～3min，优选为1min，2min或3min。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述HgCl2溶液的质量分数为0.1％，0.2％或0.3％，浸润时间为8min，9min，或10min。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预处理包括：选择优良的红花木莲作为外植体母株，取外植体，经清洗和无菌水洗涤后备用。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述外植体母株为品种典型特性明显、无病虫害且长势强的优良红花木莲植株。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述清洗包括：将外植体放入烧杯中，加入洗衣粉，轻刷外植体表面，然后换水，再加入洗衣粉，并用纱布封住烧杯口，放在流水下冲洗30～90min，优选60min。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述外植体为腋芽、叶片或幼嫩的茎段；优选地，所述外植体为腋芽；更优选地，所述腋芽为表面无物理伤害、无病害、未有腐烂和形状完好的腋芽。9.根据权利要求1～8任一项所述方法获得的外植体。10.权利要求9所述外植体在制备红花木莲组培苗中的应用。2CN108094202A说明书1/6页一种红花木莲外植体消毒方法、外植体及其应用技术领域[0001]本发明涉及组培领域，具体而言，涉及一种红花木莲外植体消毒方法、外植体及其应用。背景技术[0002]红花木莲(Manglietiainsignis(Wall.)Bl.)为木兰科木莲属植物，被列为国家三级保护珍稀树种，属常绿阔叶乔木。红花木莲不仅是名贵稀有的园林观赏树种，而且具有很高的经济价值和药用价值。其花色鲜艳夺目；其果实为深红色，悬挂枝头，颇为美观，成为秋天一大景观；其树干通直，木材纹理通直，结构细密，有光泽、香味，心材耐腐，不翘不裂，加工容易，是优良的装饰用材和胶合板材树种；其树皮和枝皮具有行气醒脾、消积导滞的功效，用于脾湿所致纳呆少食、腹胀、脘腹不舒等症；治食积胃脘而腹痛、腹泻、嗳腐吞酸、舌苔厚腻等症。[0003]红花木莲在自然界以零星分布为主，产于湖南西南部、广西、四川西南部、贵州(雷公山、梵净山、安龙)、云南(景东、无量山、红河、文山)、西藏东南部。生于海拔900-2600m常绿阔叶林或常绿落叶阔叶混交林中。尼泊尔、印度东北部、缅甸北部也有分布。在中国，至今全国尚未发现成片的红花木莲纯林，仅在云南发现一片混交林，是全国迄今发现最大的自然群落。[0004]红花木莲分布区域广但分布零星，又由于红花木莲成熟胚囊的卵细胞败育率高和人为采伐利用等种种原因，成年植株数量逐渐减少，到濒危的境地。组织培养技术是保护濒危植物的有效途径之一。[0005]利用组织培养技术，外植体的选取、预处理、消毒方法是组织培养技术成功的关键，也是保证成活率的关键。红花木莲腋芽比较鲜嫩，同时外带菌类较多，消毒较难。[0006]有鉴于此，特提出本发明。发明内容[0007]本发明的第一目的在于提供一种红花木莲外植体消毒方法，所述方法能够有效杀灭外植体