蜡梅CpFT基因及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109988229A(43)申请公布日2019.07.09(21)申请号201910181359.6A01H6/20(2018.01)(22)申请日2019.03.11(71)申请人西南大学地址400715重庆市北碚区天生路2号(72)发明人李志能刘宁江英杰眭顺照李名扬李先源(74)专利代理机构北京智为时代知识产权代理事务所(普通合伙)11498代理人王加岭杨静(51)Int.Cl.C07K14/415(2006.01)C12N15/29(2006.01)C12N15/82(2006.01)C12N1/21(2006.01)A01H5/00(2018.01)权利要求书1页说明书8页序列表5页附图5页(54)发明名称蜡梅CpFT基因及其应用(57)摘要本发明提供蜡梅CpFT基因及其在花期调控中的应用。本发明提供的蜡梅CpFT的基因序列如SEQIDNo.1所示。本发明首次克隆获得蜡梅CpFT基因，并通过转基因技术，在植物拟南芥中验证了该基因的功能。结果表明，蜡梅CpFT基因表达量越高，转基因拟南芥的莲座叶数越少，抽葶时间、第一朵花开放时间、第一个果荚形成时间越短。由于植株由营养生长向生殖生长转化的时间提前，导致营养生长时间缩短，莲座叶数减少，开花时间提前。表明蜡梅CpFT基因能够促进植株开花，同时对植株的营养生长具有抑制作用,并且该基因在低温打破蜡梅花蕾休眠导致花朵膨大、开放过程中起重要作用。CN109988229ACN109988229A权利要求书1/1页1.蜡梅CpFT蛋白，其为：1)由SEQIDNo.2所示的氨基酸组成的蛋白质2)在SEQIDNo.2所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由1)衍生的蛋白质。2.编码权利要求1所述的蜡梅CpFT蛋白的基因。3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，序列如SEQIDNo.1所示。4.含有权利要求2或3所述基因的载体。5.含有权利要求4所述载体的宿主细胞。6.含有权利要求2或3所述基因的工程菌。7.权利要求2或3所述基因在植物花期调控中的应用。8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，将所述基因转入植物基因组中，并在转基因植物中超量表达，使转基因植物营养生长受到抑制，促进植物提前开花。9.一种转基因植株的构建方法，采用农杆菌介导的方法，将含有权利要求2或3所述基因的载体转入植物基因组中，筛选获得转基因植株。2CN109988229A说明书1/8页蜡梅CpFT基因及其应用技术领域[0001]本发明涉及基因工程领域，具体地说，涉及蜡梅CpFT基因的克隆及其应用。背景技术[0002]蜡梅(Chimonanthuspraecox(L.)Link)，属于蜡梅科(Calycanthaceae)蜡梅属(ChimonanthusLindl.)，又称金梅、腊梅、黄梅花等，是我国特有的名贵观赏花木。蜡梅是丛生灌木，可高达3至4米。落叶，叶对生，半革质；花着生于叶腋；最外轮的花被片成褐色鳞片状，向内过渡为黄色；花期12月至翌年3月；果期8月至9月，属于聚合瘦果。蜡梅是少有的冬季开花植物，先花后叶，花朵甜美，花色金黄，花瓣蜡质，花香馥郁，具有较高经济和观赏价值。蜡梅被广泛应用于园林绿化及制作盆景等，其药用和食用价值也得到了开发和利用，且近年来蜡梅作为一种新兴的切花材料深受人们喜爱。[0003]随着现代分子生物学的发展，生物技术已经广泛的应用于植物、动物和微生物的研究中。眭順照(2006)等人利用EST技术构建了第一个蜡梅花的cDNA文库，且对蜡梅开花过程中的基因进行了表达分析，在其基础上先后克隆出不同功能相关的基因，并对其进行了系统的研究：CpAP3与蜡梅的花器官发育有关，推测其与花被片形成和发育有关；CpPEX22与抗衰老、抗氧化存在一定关系；CpAGL6转入拟南芥中与野生型的拟南芥相比出现提前开花、植株矮化、雄蕊的形态及数目都发生了变化；CpKTI胰蛋白酶抑制基因，通过将其转入烟草超量表达，发现使烟草的抗虫性提高；CpPR-4(秦华，2012)为病程相关蛋白基因等。上述蜡梅基因功能的初步研究，为以后蜡梅分子生物学研究做出一定贡献。[0004]目前，蜡梅花发育方面的分子研究已取得一定成果。雷兴华(2007)将蜡梅CpAP3基因转入烟草，发现转基因烟草出现雄蕊瓣化现象；张琼(2011)等发现CpAP3基因在矮牵牛中超表达导致矮牵牛的花瓣和雄蕊出现异常。刘道凤(2012)对蜡梅CpMADS1基因功能进行了探索，发现CpMADS1基因转入矮牵牛后，部分株系出现雄蕊瓣化现象。罗登攀(2014)将蜡梅CpAGL2基因转入拟南芥导致拟南芥的雄蕊缺失，推测CpAGL2基因可能参与雄蕊的发育。王蓓果(2011)将Cp