水貂巴氏杆菌病蜂胶灭活苗.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN102614511102614511B(45)授权公告日2014.12.24(21)申请号201210095845.4疫效果试验.《中国草食动物》.2008,第28卷(第6期),第49-50页.(22)申请日2012.04.05(73)专利权人青岛农业大学审查员于菲地址266109山东省青岛市城阳区青岛农业大学(72)发明人单虎张传美秦志华王述柏蔡秀磊张启迪(51)Int.Cl.A61K39/39(2006.01)A61K39/102(2006.01)A61P31/04(2006.01)(56)对比文件CN101036783A,2007.09.19,实施例1.CN1052330A,1991.06.19,权利要求，说明书第4段至第2段.李元新等.兔病毒性出血症_巴氏杆菌病二联蜂胶灭活苗的研制.《畜牧兽医杂志》.2010,第29卷(第6期),第17-21页.赵恒章等.兔巴氏杆菌蜂胶苗的制备及免权利要求书1页权利要求书1页说明书3页说明书3页(54)发明名称水貂巴氏杆菌病蜂胶灭活苗(57)摘要本发明提供了一种水貂巴氏杆菌病蜂胶灭活苗及其制备方法。本发明的实质内容是取水貂源巴氏杆菌接种血琼脂斜面，37℃，培养24小时，检验纯正，作为种子菌液接种血琼脂培养基，经灭活后制成水相与蜂胶佐剂充分混合制成水貂源巴氏杆菌病蜂胶灭活疫苗。本疫苗能够有效预防水貂源巴氏杆病的发生，并能显著减少注射疫苗后的不良反应和对毛皮质量的影响，为毛皮动物疾病的控制创造条件。CN102614511BCN102645BCN102614511B权利要求书1/1页1.一种水貂巴氏杆菌病蜂胶灭活疫苗的制备方法，包括如下步骤：疫苗制备：选用于中国兽医药品监察所菌种室购买的一株多杀性巴氏杆菌C52-17作为生产疫苗的菌株,复苏后接种血琼脂斜面培养基18小时，镜检无杂菌后作为种子液，以适量的菌种培养物接种血琼脂斜面经37℃培养18-24小时，取培养菌液加入甲醛溶液，使其含甲醛的最终浓度为0.4%，37℃摇床灭活24小时；疫苗灭活检验：将甲醛灭活后的菌液取100微升接于3ml液体培养基中，一次培养取三次样，每个样品接种于三个试管中观察五天进行灭活安全检验，五天后接种的液体培养基仍澄清无混浊则安全检验合格；成品疫苗制备：按每ml疫苗含蜂胶干物质含量为8-15mg标准添加蜂胶溶液搅拌15-20分钟，使其充分混合乳化；采用三批蜂胶灭活疫苗进行免疫保护期测定：分为实验组和对照组，实验组分六组，每组30只水貂，用所述三批蜂胶灭活疫苗免疫，每批疫苗免疫10只水貂，每后肢内侧肌肉注射1mL；对照组分为六组，每组10只水貂，后肢内存肌肉注射生理盐水对1mL,免疫后的第1-6个月，每月用巴氏杆菌分离毒株攻毒，测定疫苗对毒株的保护力，所述蜂胶灭活疫苗对水貂巴氏杆菌的保护期为6个月，免疫保护率在80%以上。2CN102614511B说明书1/3页水貂巴氏杆菌病蜂胶灭活苗技术领域[0001]本发明涉及一种以蜂胶为佐剂的水貂巴氏杆菌病灭活疫苗及其制备方法，属于兽医生物制品技术领域。背景技术[0002]巴氏杆菌病主要是由多杀性巴氏杆菌及溶血巴氏杆菌引起的畜、禽、野生动物和毛皮动物的细菌性出血性、败血性传染病。本病分布广泛，世界各地均有发生。近几年水貂巴氏杆菌亦有流行，它发病率高、死亡率高，对毛皮动物饲养业危害很大，经常造成严重的经济损失。[0003]目前我国对水貂巴氏杆菌病主要采用是抗生素药物治疗，但药物治疗存在一定的缺陷，一旦停药容易复发，而且容易产生抗药性。防治该病发生的有效措施是研制相应的疫苗。[0004]为增强疫苗的免疫源性，常在灭活菌疫苗的研制中加入免疫佐剂。免疫佐剂是一种免疫调节剂，可以先于抗原或与抗原混合或同时注入动物体内，能特异性地增强抗原的免疫原性，提高免疫效果。免疫佐剂可增强抗原所激发的抗体应答,可提高免疫原性,以及增强吞噬细胞的非特异性杀伤功能和特异性细胞免疫的刺激作用等。因此,佐剂是疫苗特别是灭活疫苗所必不可少的成分。蜂胶作为一种具有生物活性的免疫佐剂所显示出的优点已逐渐被认识。蜂胶具有广谱生物学活性,是一种良好的免疫增强剂和刺激剂,它既能引起特异性免疫应答,又能启动非特异性防御机制,有增强免疫抗体生成和提高白细胞吞噬能力的明显效果，使用该佐剂后可以有效保护皮毛质量。发明内容[0005]本发明的目的在于提供一种以蜂胶为佐剂的水貂源巴氏杆菌病灭活疫苗的制备方法，使其免疫水貂后副作用小，对毛皮质量影响小，免疫产生时间早，免疫力强，免疫期长。[0006]具体实施步骤：[0007]1.水貂源巴氏杆菌灭活原液的制备。[0008]1）取水貂源的多杀性巴氏杆菌接种血琼脂斜面，37℃培养24小时