透明质酸寡聚糖包裹的紫杉醇脂质体及其制备方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103006560103006560B(45)授权公告日2014.10.15(21)申请号201210534240.0US2002/0131995A1,2002.09.19,WO2010/118200A2,2010.10.14,(22)申请日2012.12.12GalJourno-Gershfeldetal..Hyaluronan(73)专利权人上海市第六人民医院Oligomers-HPMACopolymerConjugatesfor地址200233上海市徐汇区宜山路600号TargetingPaclitaxeltoCD44-Overexpressing(72)发明人高锋刘鷖雯何怡青杨翠霞OvarianCarcinoma.《PharmRes》.2010,第刘华1121-1133页.(74)专利代理机构上海申新律师事务所31272Hussainisyedshaqhattaletal..代理人刘懿CharacterizationofCD44-Mediatedcancercelluptakeandintracellulardistribution(51)Int.Cl.ofhyaluronan-graftedliposomes.《molecularA61K9/127(2006.01)pharmaceutics》.2011,第8卷第1233-1246页.A61K31/337(2006.01)审查员徐寅A61K47/36(2006.01)A61P35/00(2006.01)(56)对比文件WO01/39815A2,2001.06.07,WO2010/140869A2,2010.12.09,CN1174557A,1998.02.25,US2009/0104143A1,2009.04.23,权利要求书1页权利要求书1页说明书6页说明书6页(54)发明名称透明质酸寡聚糖包裹的紫杉醇脂质体及其制备方法(57)摘要本发明涉及一种透明质酸寡聚糖包裹的紫杉醇脂质体的制备方法，包括以下步骤：称取磷脂和紫杉醇，制备磷脂-紫杉醇蜂窝状薄膜；将制得的薄膜水化；将寡聚糖与乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺在醋酸盐缓冲液中预孵育；将水化好的悬浊液加入到寡聚糖-醋酸盐缓冲液中，孵育；将获得的混合物分离，制得寡聚糖包裹的紫杉醇脂质体。该寡聚糖包裹的紫杉醇脂质体大小均一，包封率高，性质稳定，有效地提高了紫杉醇在水中的溶解性。另外，针对CD44高表达的肿瘤细胞（如乳腺癌等），该复合物具有较强靶向性（透明质酸特异结合CD44），能够有效地提高紫杉醇在肿瘤部位的浓度，减少紫杉醇的用药剂量，同时降低药物对CN103006560BCN10365B人体的毒性作用并增强其生物利用度。CN103006560B权利要求书1/1页1.一种透明质酸寡聚糖包裹的紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，称取磷脂和紫杉醇，制备磷脂-紫杉醇蜂窝状薄膜；步骤2，将制得的薄膜水化，使磷脂的质量百分浓度为1%~5%，得到悬浊液；步骤3，将透明质酸寡聚糖与乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺在pH值为3~6的醋酸盐缓冲液中35~50℃预孵育，得到寡聚糖-醋酸盐缓冲液；步骤4，将步骤2获得的悬浊液加入到步骤3获得的透明质酸寡聚糖-醋酸盐缓冲液中，35~50℃孵育；步骤5，将步骤4获得的混合物分离，制得透明质酸寡聚糖包裹的紫杉醇脂质体；其中，磷脂、紫杉醇、透明质酸寡聚糖和乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺的质量比为（20~50）:1:（0.25~1）:（2.5~10），透明质酸寡聚糖与醋酸盐缓冲液的质量体积比为（2~8）g:1mL。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，将磷脂和紫杉醇溶解在溶剂中，然后溶剂挥发制得磷脂-紫杉醇蜂窝状薄膜。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述磷脂选自二烷酰基磷脂酰胆碱、二油酰基磷脂酰胆碱、二烷酰基磷脂酰醇胺、二油酰基磷脂酰醇胺、二烷酰基磷脂酰甘油和二烷酰基磷脂酰氨基酸中的至少一种。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述磷脂为二月桂酰磷脂酰乙醇胺和二月桂酰磷脂酰甘油的混合物，其中，二月桂酰磷脂酰乙醇胺和二月桂酰磷脂酰甘油的质量比为（9~1）:1。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述醋酸盐缓冲液的pH值为4.5。6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中预孵育至少1~3h，步骤4中孵育为至少4~12h。7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中预孵育温度为37℃，步骤4中孵育温度为37℃。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5中，将步骤4获得的混合物透析，均质，干燥，制得寡聚糖包裹的紫