一种酒神菊属型蜂胶质量控制方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103175922103175922B(45)授权公告日2014.11.12(21)申请号201310075055.4(22)申请日2013.03.08(73)专利权人浙江大学地址310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号(72)发明人张翠平胡福良黄帅(74)专利代理机构杭州求是专利事务所有限公司33200代理人张法高赵杭丽(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)审查员王毅权权利要求书1页利要求书1页说明书4页说明书4页附图2页附图2页(54)发明名称一种酒神菊属型蜂胶质量控制方法(57)摘要本发明提供一种酒神菊属型蜂胶质量控制方法，先对供试样品进行冷冻粉碎混匀，然后用乙醇超声波提取，过滤浓缩制得浸膏，然后用甲醇超声溶解，经微孔膜过滤后，用高效液相色谱测定方法进行测定，以阿替匹林C的有无确定是否为酒神菊属型蜂胶，以阿替匹林C含量的高低作为鉴别酒神菊属型蜂胶质量优劣的标准。本发明首次建立区分酒神菊属型蜂胶与其它类型蜂胶的检测方法，提出阿替匹林C不仅是酒神菊属型蜂胶的鉴别指标，还是评价其质量优劣的指标。本发明方法设计合理、操作简便、分离效果好、灵敏度高，可行性强，解决了酒神菊属型蜂胶鉴别及质量控制中的一个重要的技术问题。CN103175922BCN1037592BCN103175922B权利要求书1/1页1.一种酒神菊属型蜂胶质量检测方法，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）称取阿替匹林C标准品10mg，用甲醇定容为10mL，制得阿替匹林C标准储备液，吸取阿替匹林C标准储备液，用甲醇稀释定容，配制成标准工作液，分别用微孔膜过滤，用高效液相色谱进行分析，每个样品重复3次，绘制阿替匹林C标准曲线；（2）取供试样品进行冷冻粉碎混匀，然后用体积比为85%的乙醇超声波提取，料液比1∶15，过滤浓缩制得浸膏，再用纯甲醇超声溶解，经微孔膜过滤后，用高效液相色谱测定方法进行测定；（3）将供试蜂胶样品色谱图与阿替匹林C标准品色谱图比较以鉴别出酒神菊属型蜂胶；（4）根据标准曲线计算阿替匹林C含量，评价酒神菊属型蜂胶的质量优劣；液相色谱的条件为：流速为1.0mL/min，检测波长为310nm，进样量为2µL，色谱柱为SepaxHP-C18，4.6×150mm,5µm，柱温为30℃；流动相为纯甲醇和体积比为1%的乙酸水溶液按体积比梯度洗脱，洗脱程序为：0-30min，甲醇25-55%；30-60min，甲醇55-80%；60-70min，甲醇80-95%；70-80min，甲醇95-25%。2.一种根据权利要求1所述的酒神菊属型蜂胶质量检测方法在检测酒神菊属型蜂胶中的应用，其特征在于，通过与阿替匹林C标准品对照，检测酒神菊属型蜂胶：（1）在高效液相色谱图中检测到阿替匹林C色谱峰，则表明为酒神菊属型蜂胶，（2）在高效液相色谱图相应位置不出峰，则不是酒神菊属型蜂胶。3.一种根据权利要求1所述的酒神菊属型蜂胶质量检测方法在评价酒神菊属型蜂胶质量优劣中的应用，其特征在于，通过与阿替匹林C标准品对照，评价酒神菊属型蜂胶质量：（1）酒神菊属型蜂胶中阿替匹林C含量高于4.0%，则为优质蜂胶；（2）酒神菊属型蜂胶中阿替匹林C含量低于2.0%，则为劣质蜂胶。2CN103175922B说明书1/4页一种酒神菊属型蜂胶质量控制方法技术领域[0001]本发明属蜂胶质量控制领域，涉及一种酒神菊属型蜂胶质量控制方法，用于鉴别酒神菊属型蜂胶，评价酒神菊属型蜂胶的质量优劣。背景技术[0002]蜂胶是蜜蜂采集植物叶芽或树皮裂缝处分泌的树脂并混入上颚腺分泌物和蜂蜡而成的芳香固体物。蜂胶具有抑菌、抗原生动物、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤、调节血脂血糖、提高免疫力等多种生理药理活性。但蜂胶的化学成分和药理活性依蜂胶采集的地理位置不同而变化很大。[0003]根据蜂胶的植物来源，世界上的蜂胶主要可以分为五种类型：杨树型、酒神菊属型、克鲁西属型、血桐属型和地中海地区类型。其中，酒神菊属型蜂胶是目前国内外商业上最流行、研究最多的蜂胶类型之一，现已广泛应用于保健食品中来改进人类健康和预防疾病。[0004]酒神菊属型蜂胶采自巴西东南部和中西部地区，其植物来源是BaccharisdracunculifoliaDC.，其主要成分为异戍烯苯丙类和p-香豆酸的异戊烯基衍生物，黄酮类化合物含量较低。酒神菊属型蜂胶进口至中国已有十余年历史，由于缺少酒神菊属型蜂胶的质量评价方法，酒神菊属型蜂胶的质量控制参照中国蜂胶的国家标准。而中国的蜂胶主要植物来源为杨属及其杂交属，主要活性成分为类黄酮，蜂胶标准中也是以类黄酮含量的高低为依据判断蜂胶质量优劣。参照中国的蜂胶国家标准，酒神菊属型蜂胶的总黄酮含量达不到国家标准的要求