一种酒神菊属型蜂胶质量控制的方法及应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103592383103592383A(43)申请公布日2014.02.19(21)申请号201310543934.5(22)申请日2013.11.06(71)申请人浙江大学地址310027浙江省杭州市西湖区浙大路38号申请人蜂乃宝本铺（南京）保健食品有限公司(72)发明人张翠平胡福良黄帅刘嘉(74)专利代理机构杭州求是专利事务所有限公司33200代理人张法高赵杭丽(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书4页说明书4页附图2页附图2页(54)发明名称一种酒神菊属型蜂胶质量控制的方法及应用(57)摘要本发明提供一种酒神菊属型蜂胶质量控制的方法，以绿原酸、p-香豆酸、咖啡酸、芦丁和ArtepillinC为参照指标，用高效液相色谱方法，检测蜂胶中绿原酸、p-香豆酸、咖啡酸、芦丁和ArtepillinC，真正实现酒神菊属型蜂胶的保真去伪。本发明方法鉴别酒神菊属型蜂胶的真实性具有准确度高，灵敏度强、相对时间短以及成本低等优点，解决了酒神菊属型蜂胶真实性鉴别及质量控制的技术难题。可以定性鉴别酒神菊属型蜂胶，有效辨别出是否添加了芦丁，是一种有效的酒神菊属型蜂胶保真去伪的方法。CN103592383ACN1035928ACN103592383A权利要求书1/1页1.一种酒神菊属型蜂胶质量控制的方法，其特征在于，通过以下方案实现：（1）分别称取绿原酸、p-香豆酸、咖啡酸、芦丁和阿替匹林C对照品10、10、10、40、10mg，用甲醇定容为10mL，然后分别取0.5、0.2、0.5、0.25、4mL用甲醇定容为10mL作为标准混合液，经微孔膜过滤后，用高效液相色谱分析；（2）取待测样品进行冷冻粉碎混匀，取0.25g，用体积比85%的乙醇超声提取，料液比1∶15-45，超声15-45min，提取2-4次，用相同浓度乙醇定容，经微孔膜过滤后，用高效液相色谱测定方法进行测定；（3）将步骤（2）待测样品色谱图与步骤（1）混合标准品色谱图对比，在待测样品中检测到绿原酸、p-香豆酸、咖啡酸、阿替匹林C的特征峰，则为酒神菊属型蜂胶；在待测样品中检测到绿原酸、p-香豆酸、咖啡酸、阿替匹林C和芦丁色谱峰，则为添加了芦丁的酒神菊属型蜂胶样品；在待测样品中检测不到绿原酸和阿替匹林C色谱峰，则为非酒神菊属型蜂胶。2.根据权利要求1所述的一种酒神菊属型蜂胶质量控制的方法，其特征在于，所述的高效液相色谱的分析条件为：SepaxC18(150mm×4.6mm,5μm)；流速1mL/min；检测波长280-360nm；柱温28-35℃；进样量：2μL；流动相为：纯甲醇和体积比为1%的乙酸水混合液按体积比二元梯度洗脱，洗脱程序为：0-10min，甲醇15-25%；10-25min，甲醇25-40%；25-55min，甲醇40-60%；55-75min，甲醇60-80%；75-90min，甲醇80%。3.根据权利要求1所述的方法在酒神菊属型蜂胶质量控制中的应用。2CN103592383A说明书1/4页一种酒神菊属型蜂胶质量控制的方法及应用技术领域[0001]本发明属蜂产品领域，涉及一种酒神菊属型蜂胶质量控制的方法。背景技术[0002]蜂胶具有广泛的生物学活性，主要有抑菌、抗真菌、抗原生动物、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、抗癌和抗氧化活性。蜂胶已广泛用于保健食品，饮料及药品。[0003]巴西地处南美亚马逊流域，拥有世界最大的原始森林，植物种类冠于全球，被誉为世界的“植物宝库”。巴西不同地理来源的蜂胶化学成分及药理活性差异较大。目前研究表明，根据地理来源，化学组成及植物源可将巴西境内的蜂胶分为13个类型，其中巴西东南部的绿蜂胶是研究最多的，已出口至中国十余年，目前巴西绿蜂胶的主要进口国为日本，其次是中国。根据巴西发展工业部和对外贸易部的统计，2010年，巴西出口蜂胶51,213Kg，产值$4,346,604，即84.87$/Kg；2011年，巴西出口蜂胶38,845Kg，产值$4,537,727，即116.81$/Kg；2012年，巴西出口蜂胶41,721Kg，产值$5,401,643，即129.47$/Kg。从这些数据可以看出，与2010年相比，尽管蜂胶年出口量有所降低，但蜂胶的总产值及单产值均明显增加，其中2012年的总产值比2010年增加了50%以上。日本和中国进口的巴西蜂胶主要是酒神菊属型蜂胶，其价格也是逐增加，巴西酒神菊属型蜂胶的原料价格已达中国杨树型蜂胶原料价的十倍之多，而巴西蜂胶种类较多，如何保证巴西酒神菊属型蜂胶的真实性显得尤其重要。[0004]巴西酒神菊属型蜂胶的植物来源是BaccharisdracunculifoliaD