检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103525898103525898A(43)申请公布日2014.01.22(21)申请号201310523621.3(22)申请日2013.10.30(71)申请人集美大学地址361021福建省厦门市集美区银江路185号(72)发明人倪辉黄姝玲蔡慧农杨远帆黄高凌肖安风伍菱(74)专利代理机构厦门市新华专利商标代理有限公司35203代理人朱凌(51)Int.Cl.C12Q1/40(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书5页说明书5页附图6页附图6页(54)发明名称检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法(57)摘要本发明公开了一种检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法，其主要技术流程包括：分别测定蜂蜜淀粉酶、黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶在不同pH条件下的淀粉酶活力，根据待测蜂蜜样品的淀粉酶活性随pH值变化情况判断其中是否含有黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶，并进一步运用酶活力在不同pH条件下的比例关系及导数方法确定不同淀粉酶的含量。本发明可以用简单的方法确定蜂蜜中掺入了多少黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶，从而客观评价蜂蜜质量。CN103525898ACN1035289ACN103525898A权利要求书1/1页1.一种检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法，其特征在于：它包括以下步骤：（1）参照国标方法分别测定纯蜂蜜淀粉酶、黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的最适pH值；（2）测定待测蜂蜜样品在不同pH条件下的淀粉酶活力；（3）判断蜂蜜样品中是否掺入了黑曲霉淀粉酶并运用酶活力在各pH条件下的比例关系计算其含量；（4）判断蜂蜜样品中是否掺入了枯草芽孢杆菌淀粉酶并运用比导数方法分析其含量。2.根据权利要求1所述的检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法，其特征在于：步骤（3）是根据黑曲霉淀粉酶在pH值低于3.5时仍然具有较强的活性，而纯蜂蜜淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶在pH值低于3.5时没有活性来判断待测蜂蜜样品中是否含有黑曲霉淀粉酶并计算其含量。3.根据权利要求1所述的检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法，其特征在于：步骤（4）是根据在pH3.5以上时，蜂蜜淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶在不同pH条件下酶活性变化的趋势不同而判断待测蜂蜜样品中是否含有枯草芽孢杆菌淀粉酶并分析其含量。4.根据权利要求3所述的检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法，其特征在于：分析待测蜂蜜样品中枯草芽孢杆菌淀粉酶含量时采用了比导数值计算方法，即根据淀粉酶活性的比导数和枯草芽孢杆菌淀粉酶含量的量化模型（标准曲线）而定量分析待测蜂蜜样品中枯草芽孢杆菌淀粉酶的含量。5.根据权利要求4所述的检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法，其特征在于：所述的比导数值计算方法所采用的计算公式如下：其中，An为待测样品在pH值为i处的淀粉酶活力；εai、εbi分别为一摩尔蜂蜜淀粉酶和一摩尔枯草芽孢杆菌淀粉酶在pH值为i时的酶活力；Cb为枯草芽孢杆菌淀粉酶的含量。6.根据权利要求5所述的检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法，其特征在于：计算比导数的pH范围为5.5-6.6。2CN103525898A说明书1/5页检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法技术领域[0001]本发明涉及一种蜂蜜检测技术，尤其涉及检测蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶的方法。本发明的主要目的是检测蜂蜜中是否掺入或人为添加了黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢杆菌淀粉酶，其技术领域属于食品检测领域。背景技术[0002]蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜与分泌物，经过充分酿造而储存在蜂巢内的一种甜而粘稠、透明或半透明的胶状物质，其营养丰富，含有葡萄糖、果糖、维生素、酶、矿物质和氨基酸等成分。此外，蜂蜜具有多种保健功能，《本草纲目》记载蜂蜜具有清热、补中、解毒、润燥、止痛之效，现代研究表明蜜蜂具有治疗溃疡、保护肝脏、治疗冻疮的作用。因此，蜂蜜是各国人民都喜欢的一种天然保健食品。[0003]淀粉酶活性是评价蜂蜜质量的重要指标，也是判断蜂蜜新鲜程度、成熟度以及是否掺假的一项重要指标。在蜂蜜中掺入淀粉转化糖、蔗糖及对蜂蜜进行加热或经过发酵处理等都会引起蜂蜜淀粉酶值显著降低，各国都通过检测蜂蜜淀粉酶值而将这些蜂蜜和正常蜂蜜相区别。然而，在这类蜂蜜中人为添加商品淀粉酶可以使它们的淀粉酶检测值达到正常或优质蜂蜜的水平，且目前缺乏测定蜂蜜中商品淀粉酶的方法。因此，用蜂蜜淀粉酶值作为评价蜂蜜品质的指标具有很大的局限性，很容易被掺假企业钻漏洞。[0004]相关研究表明，不同来源的淀粉酶具有不同的酶学性质，来源于蜜蜂消化液的蜂蜜淀粉酶与商品淀粉酶的