雷公藤乙素作为有毒蜂蜜的生物标志物的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN107807184A(43)申请公布日2018.03.16(21)申请号201710939867.7(22)申请日2017.09.30(71)申请人中国农业科学院蜜蜂研究所地址100093北京市海淀区香山北沟1号(72)发明人杨术鹏李熠周金慧张金振金玥赵文(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人王文君王文红(51)Int.Cl.G01N30/02(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图5页(54)发明名称雷公藤乙素作为有毒蜂蜜的生物标志物的应用(57)摘要本发明涉及食品安全领域，具体公开了雷公藤乙素作为有毒蜂蜜的生物标志物及其在鉴别有毒蜂蜜中应用。本发明经过研究发现，雷公藤乙素尤其适用于有毒蜂蜜的识别和鉴定，以及蜜蜂中毒人群的早期诊断。在此基础上，本发明进一步提出了一种雷公藤乙素的UHPLC-QExactiveplus检测方法，并对蜜蜂样本的前处理条件和检测参数进行了优化。本发明所提供的有毒蜂蜜的生物标志物和检测方法，对保护蜂蜜消费者的生命健康和维护蜜蜂消费行业健康发展具有重要现实意义。CN107807184ACN107807184A权利要求书1/1页1.雷公藤乙素作为生物标志物在鉴别蜂蜜中是否含有雷公藤有毒蜂蜜方面的应用。2.一种检测蜂蜜中是否含有雷公藤有毒蜂蜜的方法，其特征在于，检测蜂蜜样本中是否含有雷公藤乙素。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用UHPLC-QExactivePuLs检测蜂蜜样本，通过查看其图谱中是否含有雷公藤乙素的特征峰，判定蜂蜜是否为有毒蜂蜜。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，雷公藤乙素在UHPLC-QExactiveplus的++精确提取粒子流色谱图中含有m/z377.16003([M+H]，C20H25O7)准分子离子峰，其精确质量数的误差应当小于5ppm。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，雷公藤乙素的子离子图谱(MS/MS)中应含+++有碎片离子m/z211.07590(C14H11O2)，m/z155.08608(C12H11)，m/z167.08608(C13H11)m/z++183.08099(C13H11O)，m/z195.08099(C14H11O)，且其精确质量数的误差应当小于5ppm。6.根据权利要求2～5任一项所述的方法，其特征在于，蜂蜜样本在检测前，进行前处理：取蜂蜜样本加入水中溶解，混匀使蜂蜜完全溶解，利用乙酸乙酯提取有机相。7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，利用乙酸乙酯提取有机相后，氮气吹干，然后用20％甲醇水溶解，过0.22μm的滤膜。8.根据权利要求2～5任一项所述的方法，其特征在于，采用UHPLC-QExactivePuLs检测时的液相条件如下：流动相为：A：0.1％甲酸水，B：0.1％甲酸乙腈；流速：0.30ml/min；色谱柱温度为：30℃；进样量为：5μL；色谱柱类型为C18；采用梯度洗脱程序；UHPLC-QExactiveplus的质谱条件如下：离子化模式：正离子模式；采集模式为FμLlMassandddMS2；雾化气温度：320。2CN107807184A说明书1/5页雷公藤乙素作为有毒蜂蜜的生物标志物的应用技术领域[0001]本发明涉及食品安全领域，具体地说，涉及雷公藤乙素作为有毒蜂蜜的生物标志物及其在鉴别有毒蜂蜜中应用。背景技术[0002]蜂蜜是蜜蜂采集了蜜源植物的花蜜或蜜露与其分泌物混合，经过一段时间酿制之后形成的具有甜味食品。蜂蜜属于传统的天然食品，具有美容、养颜、安神等保健功能，深受百姓喜爱。通常情况下，蜂蜜甘甜可口、无毒无害。我国地大物博，部分区域分布着大量的有毒蜜源植物，如雷公藤、昆明山海棠、乌头、黄杜鹃和钩吻等。蜜蜂采集了这些植物的花蜜之后，便会酿制成有毒蜂蜜，这些蜂蜜一般对蜜蜂毒性较小，但对人的毒性较大，人一旦误食了这些有毒蜂蜜之后，发生蜂蜜中毒，严重者甚至致人死亡。[0003]据不完全统计，2014-2016年，三年期间我国一共爆发了9起蜂蜜中毒事件，涉及的中毒人群高达99人，致人死亡的有13人。可见蜂蜜中毒对我国危害严重，涉及人数之多、致死率之高，已经属于严重的公共卫生事件，受到全社会的关注。蜂蜜中毒并非近期新出现现象，明代《本草纲目》中详细的记载了“七月勿食生蜜，令人暴下霍乱”。古人在生产生活中便已经意识到了夏季所产的蜂蜜可能有毒，特别是干旱的天气里，易于发生中毒事件；并怀疑有毒蜂蜜可能和有毒蜜源植物相关。此外，国外也有“蜂蜜中毒”事件的报道，尤其是是毗邻黑海的土耳其地区和青藏高原的尼泊尔地区，每年都有蜂蜜中毒事件的发生。通过对蜂蜜中毒地区蜜源植物的调查，确定了这些有毒蜂蜜是由蜜蜂采集了有毒的品