吲哚-3-乙酸甲酯在鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN111398498A(43)申请公布日2020.07.10(21)申请号202010197053.2(22)申请日2020.03.19(71)申请人中国农业科学院蜜蜂研究所地址100093北京市海淀区香山北沟1号(72)发明人周金慧王欣然李熠陈兰珍杨术鹏张金振金玥杨宇晖赵文王鹏黄京平(74)专利代理机构北京路浩知识产权代理有限公司11002代理人商秀玲(51)Int.Cl.G01N30/88(2006.01)权利要求书1页说明书10页附图6页(54)发明名称吲哚-3-乙酸甲酯在鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的应用(57)摘要本发明属于食品检测领域，具体涉及吲哚-3-乙酸甲酯在鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的应用。本发明首次提出以内源性小分子非挥发性物质吲哚-3-乙酸甲酯作为中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜鉴别的特征标志物，并确定了中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中吲哚-3-乙酸甲酯的含量范围。同时，本发明进一步提供了中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的鉴别方法，该方法定量准确，稳定性强，便于操作和推广，对于准确识别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜有着重要意义，有利于促进蜂产品产业化发展，有利于养蜂行业健康和可持续发展。CN111398498ACN111398498A权利要求书1/1页1.吲哚-3-乙酸甲酯在鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的应用。2.一种中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜的鉴别方法，其特征在于，以吲哚-3-乙酸甲酯的含量为鉴别依据，鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜。3.根据权利要求2所述的鉴别方法，其特征在于，若蜂蜜样本中吲哚-3-乙酸甲酯的含量介于17.91-363.75μg/kg，则判断所述蜂蜜样本为中蜂蜂蜜；若蜂蜜样本中吲哚-3-乙酸甲酯的含量介于0.99-9.69μg/kg，则判断所述蜂蜜样本为意蜂蜂蜜。4.根据权利要求2或3所述的鉴别方法，其特征在于，采用LC-QQQ检测蜂蜜样本中吲哚-3-乙酸甲酯的含量。5.根据权利要求4所述的鉴别方法，其特征在于，所述LC-QQQ中液相色谱条件如下：Agilent1290InfinitiyII；色谱柱：AgilentPoroshell，EC-C18，2.1×100mm，2.7μm；流动相A：0.1％甲酸水，流动相B：乙腈；柱温：35℃；流动相梯度为：0-1min，10％的流动相B；2min，50％的流动相B；3min，70％的流动相B；4-5.5min，100％的流动相B；6-8min，10％的流动相B。6.根据权利要求5所述的鉴别方法，其特征在于，所述LC-QQQ中MS/MS条件如下：Agilent6495三重四级杆LC/MS/MS系统；模式：ESI+；干燥气温度：290℃；干燥气流速：12L/min；雾化器：45psi；鞘气温度：250℃；鞘气流速：11L/min；毛细管电压：3500V；MRM参数设置如下：锥孔电压：380V；定量离子对：190.0＞130.1，碰撞能量：6eV；定性离子对：190.0＞103.0，碰撞能量：42eV。7.根据权利要求4所述的鉴别方法，其特征在于，在采用所述LC-QQQ进行检测前，对所述蜂蜜样本进行SPE前处理。8.根据权利要求7所述的鉴别方法，其特征在于，所述SPE前处理具体为：将蜂蜜样品与乙腈水溶液混合，离心后经PCX固相萃取柱净化；其中，所述PCX固相萃取柱预先用甲醇和水活化，淋洗液为水，洗脱液为氨化甲醇，复溶液为乙腈水溶液。9.根据权利要求8所述的鉴别方法，其特征在于，以体积比计，所述氨化甲醇中含有1％异丙醇。2CN111398498A说明书1/10页吲哚-3-乙酸甲酯在鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的应用技术领域[0001]本发明涉及食品检测领域，具体涉及吲哚-3-乙酸甲酯在鉴别中蜂蜂蜜和意蜂蜂蜜中的应用。背景技术[0002]蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物结合后，经充分酿造而成的天然甜物质。来源于不同的蜜蜂种类、蜜源植物、产地、甚至采收和加工方法的差异均可导致蜂蜜中内源性活性组分的不同。意大利蜜蜂和中华蜜蜂是我国饲养的两个主要蜜蜂品种，目前我国有900万左右的蜂群，其中意大利蜜蜂为800万群，中华蜜蜂的蜂群数量在100万群左右。意蜂蜂蜜是从国外引进的意大利蜜蜂采集并酿造而成的，意蜂易饲养，繁殖快，蜂蜜产量高，能采集大面积蜜源。但是通常意蜂蜂蜜生产周期短,含水量大,夏季易发酸起沫变质,通常需要经过后期的加工程序才可食用。中华蜜蜂作为中国特有蜜蜂品种，其生产的蜂蜜深受国人喜爱，与意大利蜜蜂相比，春季采蜜时间早，秋季停止采蜜时间晚，行动敏捷，适应性强，而且能采集面积小的蜜源，适合山区饲养。所以中华蜜蜂多采集森林或山区的杂花花蜜充分酿制而成蜂蜜。由于其蜜色泽深、口味独特、香甜味浓，含有多种能被人体直接吸收的微量元素，由于酿蜜周期长、蜜