一种高强度细胞外基质海绵及其制备方法和应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN113332494A(43)申请公布日2021.09.03(21)申请号202110577294.4A61L27/56(2006.01)(22)申请日2021.05.26(66)本国优先权数据202010456570.72020.05.26CN(71)申请人山东隽秀生物科技股份有限公司地址264006山东省烟台市开发区珠江路32号留创园3号厂房539(72)发明人高秀岩郑红霞姜红任孝敏王京燕董平格高英娇曲梁静(74)专利代理机构济南圣达知识产权代理有限公司37221代理人宋海海(51)Int.Cl.A61L27/36(2006.01)A61L27/50(2006.01)权利要求书2页说明书8页附图1页(54)发明名称一种高强度细胞外基质海绵及其制备方法和应用(57)摘要本发明公开了一种高强度细胞外基质海绵及其制备方法和应用，属于医用生物材料技术领域。本发明制备得到的高强度细胞外基质海绵呈白色蜂窝状结构，其制备方法包括以下步骤：取哺乳动物腹膜组织，机械方式联合碳酸氢钠溶液浸泡去除脂肪，EDTA‑NaOH溶液去除免疫原性物质，采用不同浓度梯度的NaOH溶液洗脱，强酸处理，纯化水洗涤，冻干，辐照灭菌形成。通过这种方式制备的海绵，保留了细胞外基质中对组织再生有益的多种成分，对基质的纤维结构破坏小从而使其强度得到保持。其蓬松的三维结构为损伤组织细胞再生提供了很好的支架结构。尤其是，该海绵在吸收液体后，其强度不降反而升高，适合使用时进行缝合处理。CN113332494ACN113332494A权利要求书1/2页1.一种高强度细胞外基质海绵，其特征在于，所述高强度细胞外基质海绵由哺乳动物腹膜组织制成，呈白色蜂窝状结构，具体的，所述高强度细胞外基质海绵呈疏松多孔的胶原蛋白海绵微孔结构。2.如权利要求1所述的高强度细胞外基质海绵，其特征在于，所述高强度细胞外基质海绵耐缝合；无免疫毒性，无细胞核残留，脂肪含量低于0.6％，DNA残留量低于7ng/mg，总糖含量低于0.3％，α‑Gal抗原清除率不小于96％，无断裂，无细胞和细胞碎片残留；同时兼具拉伸强度、缝合线撕裂力、液体吸收性和可消化性；孔隙率为～95％。3.如权利要求1或2所述的高强度细胞外基质海绵，其特征在于，其制备方法包括：取哺乳动物腹膜组织，机械方式联合碳酸氢钠溶液浸泡去除脂肪，EDTA‑NaOH溶液去除免疫原性物质，采用不同浓度梯度的NaOH溶液洗脱，强酸处理，洗涤，冻干，辐照灭菌即得。4.如权利要求3所述的高强度细胞外基质海绵，其特征在于，所述哺乳动物包括猪、牛、狗、羊、兔和鼠，优选小牛。5.如权利要求3所述的高强度细胞外基质海绵，其特征在于，所述碳酸氢钠溶液为1‑3％碳酸氢钠溶液，浸泡处理6‑12小时，然后流水冲洗20‑30小时，优选为24小时；或，所述EDTA‑NaOH溶液为乙二胺四乙酸二钠与氢氧化钠的混合溶液，其中，EDTA浓度控制为0.1～1mol/L，优选为0.5mol/L；所述NaOH浓度控制为2～5％，优选为2.5％，在室温下振摇10‑20小时，优选为15小时；或，采用不同浓度梯度的NaOH溶液洗脱具体操作方法包括依次采用高浓度NaOH溶液和低浓度NaOH溶液进行振摇洗脱；其中，所述高浓度NaOH溶液浓度为2～5％，优选为2％；所述低浓度NaOH溶液浓度为0.1％‑1％，优选为0.5％；或，所述强酸处理中使用的强酸为盐酸；优选的，所述盐酸其pH＜1；或，所述洗涤采用纯化水洗涤，洗涤至pH为4‑7；或，所述冻干程序具体包括：‑80℃冷冻24～48h，冷冻真空抽干；或，所述辐照灭菌采用钴‑60灭菌处理。6.一种高强度细胞外基质海绵的制备方法，其特征在于，包括：1)取新鲜哺乳动物腹膜组织，机械去除表面大块脂肪后，使用1‑3％NaHCO3浸泡6‑12h，流水冲洗24h，去除剩余脂肪；2)将步骤1)中组织转入0.5mol/LEDTA‑2Na‑2.5％NaOH溶液中，室温振摇15h后，改用2％NaOH溶液室温振摇2h，重复上述操作1次；3)将步骤2)中的组织转入0.5％NaOH溶液中，室温振摇30min，重复3次；4)将步骤3)中的组织转入pH值＜1的盐酸溶液中；5)将步骤4)中的组织转入纯化水中洗涤，至pH值4‑7；6)低温冷冻干燥：‑80℃冷冻24～48h，冷冻真空抽干；7)灭菌。7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1)中哺乳动物包括猪、牛、狗、羊、兔和鼠，优选小牛；所述步骤4)中，盐酸溶液的浓度为0.1mol/L‑0.5mol/L，处理时间2‑3h，优选1‑5h。8.一种高强度细胞外基质海绵，其特征在于，采用权利要求6或7所述的制备方法制备获得。2CN113332494A权利要求书2