一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法.pdf

(19)国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN114736876A(43)申请公布日2022.07.12(21)申请号202210540235.4(22)申请日2022.05.17(71)申请人云南省农业科学院蚕桑蜜蜂研究所地址661011云南省红河哈尼族彝族自治州蒙自市草坝镇(72)发明人范永慧李继娅王永生刘敏董占鹏李涛邵榆岚刘增虎罗顺高廖鹏飞李琼艳朱红涛陈海佺白红英欧秀华邓欢(74)专利代理机构昆明金科智诚知识产权代理事务所(普通合伙)53216专利代理师杨钊霞(51)Int.Cl.C12N7/00(2006.01)C12R1/93(2006.01)权利要求书1页说明书3页(54)发明名称一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法(57)摘要本发明公开了一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法，包括如下步骤：纱布过滤粗提、离心精提纯化、根据沉淀的不同颜色，分梯度的收集管壁内的乳白色沉淀，小勺去除及纯水冲刷等，直至收集液程乳白色，回收液重复该步骤；乳白色多角体液，6000r/min离心10min，去上清液，纯水冲刷表面的异色层，收集中间纯色的多角体，留存的底部杂质层与表面液又进行离心提纯；重复数次，直至沉淀表面及管壁、管底，无异色，加入适量纯水，浓度为1.0‑1.5×109个/ml，4℃保存备用。本发明采用分梯度纱布过滤，有效提升离心机纯化速度；离心提纯时不加入其他物质，提取的家蚕核型多角体病毒多角体比较纯，可以高效的超多量提取家蚕核型多角体病毒多角体。CN114736876ACN114736876A权利要求书1/1页1.一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：纱布过滤粗提S101：将病毒感染死亡的蚕体收集到收集瓶中，放入4℃冰箱中，静置一段时间，统一进行纱布过滤；S102：将收集瓶中的液体倒入一号滤杯，进行过滤，过滤两次后，滤液收集在容器中，标记为1号滤液；S103：倒完液体的收集瓶中加入少量纯水，冲洗蚕体表面，将液体继续倒入一号滤杯中进行过滤，冲洗3～4次后，将滤液倒入铺有脱脂棉、一层纱布的二号滤杯进行第二次过滤，及时更换脱脂棉和最上一层纱布，避免脱脂棉及纱布上杂质过多影响过滤效率和滤液质量，收集滤液，标记为2号滤液；S104：快速摇晃收集瓶，将蚕体残渣倒入一号滤杯中，扎紧纱布袋，用研磨棒研磨纱布袋，挤压出液体，通过二号滤杯进行过滤，及时更换脱脂棉和最上一层纱布，收集滤液，标记为3号滤液；S2：离心精提纯化S201：将1号、2号、3号滤液分别6000r/min离心5min，纯水冲洗管壁及沉淀表面细菌及杂质，加入少量纯水，振荡沉淀，使其混匀，分别收集；S202：将上述处理的2号、3号液，500r/min离心5min，上液合并收集为4号液，肉眼可见杂质、颗粒、沉淀等的收集为5号液，重复2‑3次；S203：1号原液、4号、5号上清50ml或10ml4号原液加纯水至50ml，置于50ml尖底离心管中，6000r/min离心10min，去上清，用特制小勺将表面及管底杂质舀入烧杯中回收，根据沉淀的不同颜色，分梯度的收集管壁内的乳白色沉淀，小勺去除及纯水冲刷等，直至收集液程乳白色；S204：回收液上清50ml或摇匀下部液10ml加纯水至50ml，重复数次S203步骤，收集够多的多角体；S205：乳白色多角体液，6000r/min离心10min，去上清液，纯水冲刷表面的异色层，收集中间纯色的多角体，留存的底部杂质层与表面液又进行离心提纯；重复数次，直至沉淀表面及管壁、管底，无异色，加入适量纯水，浓度为1.0‑1.5×109个/ml，4℃保存备用。2.根据权利要求1所述的一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法，其特征在于，S1中，用纱布袋套入烧杯中制成的简易过滤杯为一号滤杯；一号滤杯口铺上脱脂棉及一层纱布制成的简易过滤杯为二号滤杯。3.根据权利要求1所述的一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法，其特征在于，S104中，将蚕体残渣倒入一号滤杯中丝腺等不溶物不倒入。4.根据权利要求1所述的一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法，其特征在于，6000r/min离心10min所用的50ml离心管必须是尖底的，避免圆(弧)底离心管造成沉淀断层影响分梯度收集乳白色沉淀。5.根据权利要求1所述的一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法，其特征在于，S204中多角体如果不够，5号的下部溶液重复S202、S203和S204，收集更多的BmNPV多角体。2CN114736876A说明书1/3页一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法技术领域[0001]本发明涉及病毒(BmNPV)提取技术领域，具体为一种家蚕核型多角体病毒多角体的多量高效提取方法。背景技术[