普鲁兰酶变体及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102791854A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102791854A(43)申请公布日2012.11.21(21)申请号201080064560.3(51)Int.Cl.(22)申请日2010.12.22C12N9/44(2006.01)C12P19/16(2006.01)(30)优先权数据61/289,0402009.12.22US(85)PCT申请进入国家阶段日2012.08.22(86)PCT申请的申请数据PCT/US2010/0617612010.12.22(87)PCT申请的公布数据WO2011/087836EN2011.07.21(71)申请人诺维信公司地址丹麦鲍斯韦申请人诺维信北美公司(72)发明人M.博彻特M.格杰曼森S.克拉克B.亨利萨特M.B.希洛P.F.哈林(74)专利代理机构北京市柳沈律师事务所11105代理人封新琴权利要求书权利要求书22页页说明书说明书4040页页序列表序列表4444页页附图附图55页页(54)发明名称普鲁兰酶变体及其用途(57)摘要一种亲本普鲁兰酶的截短的普鲁兰酶变体及其用途，所述亲本普鲁兰酶属于家族GH57，包含X47域。CN10279854ACN102791854A权利要求书1/2页1.一种亲本普鲁兰酶的普鲁兰酶变体，所述亲本普鲁兰酶属于家族GH47且包含X47域，其中所述普鲁兰酶变体在X47域之后被截短。2.权利要求1的普鲁兰酶变体，其中所述亲本普鲁兰酶是下述之一：SEQIDNO:2(T.hydrorhermalis)、SEQIDNO:4(T.litoralis)中所示的普鲁兰酶，或SEQIDNO:34中所示的杂合物，或具有普鲁兰酶活性、与SEQIDNO:2、4或34至少60%相同的序列。3.权利要求1或2的普鲁兰酶变体，其中所述亲本普鲁兰酶与SEQIDNO:2、4或34相比，或在另一种亲本普鲁兰酶中取代、缺失和/或插入一个或多个(几个)氨基酸。4.权利要求1-3任一项的普鲁兰酶变体，其中所述亲本普鲁兰酶与SEQIDNO:2、4或34的成熟亲本普鲁兰酶具有至少70%，优选至少80%，优选至少85%，优选至少90%，至少95%，至少96%，至少97%，至少98%，至少99%同一性。5.权利要求1-4任一项的普鲁兰酶变体，其中所述普鲁兰酶变体与SEQIDNO:2、4或34的成熟亲本普鲁兰酶至少70%，优选至少80%，优选至少85%，更优选90%，更优选95%，更优选97%，至少98%，至少99%相同。6.权利要求1-5任一项的普鲁兰酶变体，其中所述变体由属于家族GH57、包含X47域的亲本普鲁兰酶制备，其中所述亲本普鲁兰酶是显示于SEQIDNO:2、4或34中的普鲁兰酶，或者是另一种与SEQIDNO:2、4或34具有至少60%同一性的亲本普鲁兰酶，其中所述普鲁兰酶变体包含或组成为：a)具有普鲁兰酶活性的氨基酸序列；i)其与来自SEQIDNO:2的氨基酸1-1009的序列，优选与来自SEQIDNO:2的氨基酸1-782的序列具有至少60%同一性；或ii)其与来自SEQIDNO:4的氨基酸1-988，优选与SEQIDNO:4的氨基酸1-781的序列具有至少60%同一性；iii)其与来自SEQIDNO:34的氨基酸1-782的序列具有至少60%同一性；b)SEQIDNO:2，4或34的亲本普鲁兰酶，其在X47域之后的位置处被截短；c)另一种亲本普鲁兰酶，其与SEQIDNO:2，4或34具有至少60%同一性，并在对应于a)或b)中定义的位置的位置处被截短；d)具有一个或多个(几个)取代、缺失和/或插入的氨基酸的限定于a)、b)或c)的普鲁兰酶变体。7.一种X47域。8.权利要求7的X47域，其包含或组成为SEQIDNO:2中的氨基酸序列580-768，SEQIDNO:4中的氨基酸序列579-767或SEQIDNO:34中的氨基酸序列580-768，或SEQIDNO:38中所示的氨基酸序列86-274，或另一种亲本普鲁兰酶中的对应位置。9.权利要求7或8的X47域，其包含或组成为SEQIDNO:2中的氨基酸序列580-768或SEQIDNO:4中的氨基酸序列579-767或SEQIDNO:34中的氨基酸序列580-768，或SEQIDNO:38中所示的氨基酸序列86-274；或在另一种亲本普鲁兰酶中的相应位置，其由隐蔽马尔科夫模型(HMM)确定具有至少300的得分，优选至少350的得分，优选至少400的得分，优选300-500，如380-450的得分。10.权利要求7-9任一项的X47域，其与SEQIDNO:2中的氨基酸序列580-768或SEQIDNO:4中的氨基酸序列579-767或SEQIDNO:34中的氨基酸序列580-76