检测对虾白斑综合征病毒的环介导等温扩增引物及其应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN102912040A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN102912040A(43)申请公布日2013.02.06(21)申请号201210427810.6(22)申请日2012.10.31(71)申请人广西壮族自治区兽医研究所地址530001广西壮族自治区南宁市友爱北路51号(72)发明人谢芝勋庞耀珊谢丽基谢志勤邓显文刘加波范晴罗思思(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅任凤华(51)Int.Cl.C12Q1/70(2006.01)C12Q1/68(2006.01)C12N15/11(2006.01)权利要求书权利要求书22页页说明书说明书77页页序列表序列表44页页附图附图11页页(54)发明名称检测对虾白斑综合征病毒的环介导等温扩增引物及其应用(57)摘要本发明公开了一种检测对虾白斑综合征病毒的环介导等温扩增引物及其应用。本发明所提供的引物为引物组，由引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6组成；或由所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分别为序列表中的序列1、序列2、序列3、序列4、序列5和序列6。实验证明，上述引物利用特异性强的钙黄绿素：氯化锰作为显色剂，通过环介导等温扩增检测对虾白斑综合征病毒速度快，灵敏度高，特异性强，对仪器要求不高，无需染色或显色，肉眼可直接判断结果，对虾苗引种和无特定病原体种虾培育以及对虾无公害健康养殖均有重要意义。CN10294ACN102912040A权利要求书1/2页1.检测对虾白斑综合症病毒的环介导等温扩增引物组，为引物组A或引物组B；所述引物组A由引物1、引物2、引物3、引物4、引物5和引物6组成；所述引物组B由所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4组成；所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分别为序列表中的序列1、序列2、序列3、序列4、序列5和序列6。2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：所述引物组A中所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的摩尔比为（1-2）：（1-2）：（1-3）：（1-3）：（1-2）：（1-2）；所述引物组B中所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为（1-2）：（1-2）：（1-3）：（1-3）。3.根据权利要求2所述的引物组，其特征在于：所述引物组A中所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的摩尔比为1：1：2：2：1：1；所述引物组B中所述引物1、所述引物2、所述引物3和所述引物4的摩尔比为1：1：2：2。4.检测对虾白斑综合症病毒的环介导等温扩增试剂，包括链置换型DNA聚合酶、甜菜碱、dNTPs、Mg2+、Mn2+、钙黄绿素和权利要求1-3中任一所述的引物组。5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于：所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5、所述引物6、所述dNTPs、所述Mg2+、所述Mn2+、所述链置换型DNA聚合酶、所述钙黄绿素和所述甜菜碱在所述扩增试剂中的配比为0.3-1.5μM：0.3-1.5μM：0.6-3.0μM：0.6-3.0μM：0.3-1.5μM：0.3-1.5μM：0.4-3.6mM：1-9mM：0.03-1.25mM：4-40U：37.5-125mM：0.02-0.2mM；或所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述dNTPs、所述Mg2+、所述Mn2+、所述链置换型DNA聚合酶、所述甜菜碱和所述甜菜碱在所述扩增试剂中的配比为0.3-1.5μM：0.3-1.5μM：0.6-3.0μM：0.6-3.0μM：0.4-3.6mM：1-9mM：0.03-1.25mM：4-40U：37.5-125mM：0.02-0.2mM。6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于：所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5、所述引物6、所述dNTPs、所述Mg2+、所述Mn2+、所述链置换型DNA聚合酶、所述钙黄绿素和所述甜菜碱在所述扩增试剂中的配比为0.6μM：0.6μM：1.2μM：1.2μM：0.6μM：0.6μM：2mM：7mM：0.04mM：8U：50mM：0.2mM；或所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述dNTPs、所述Mg2+、所述Mn2+、所述链置换型DNA聚合酶、所述甜菜碱和所述甜菜碱在所述扩增试剂中的配比为0.6μM：0.6μM：1.2μM：1.2μM：2mM：7mM：0.04mM：8U：50mM：0.2mM。7.根据权利要求4-6中任一所述的试剂，其特征在于：