一种牛大力种子直接诱导丛生芽并快速繁育种苗的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103039361A*(12)发明专利申请(10)申请公布号CN103039361A(43)申请公布日2013.04.17(21)申请号201310010861.3(22)申请日2013.01.11(71)申请人广西壮族自治区药用植物园地址530004广西壮族自治区南宁市长堽路189号(72)发明人姚绍嫦白隆华马小军(74)专利代理机构广西南宁公平专利事务所有限责任公司45104代理人王素娥(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书权利要求书11页页说明书说明书33页页(54)发明名称一种牛大力种子直接诱导丛生芽并快速繁育种苗的方法(57)摘要本发明公开了一种牛大力种子直接诱导丛生芽并快速繁育种苗的方法。本方法牛大力种子为外植体直接诱导丛生芽，繁育种苗的方法包括外植体灭菌、初代诱导、继代增殖、生根、移栽过程得到牛大力种苗。本发明的优点：本发明提供的整套方法操作简便，生产成本低，增殖速度快，生根移栽成活率高，便于大规模工业化生产应用，可大量、快速、持续获得高质量的牛大力试管苗，实用性强。CN10396ACN103039361A权利要求书1/1页1.一种牛大力种子直接诱导丛生芽并快速繁育种苗的方法，其特征在于，牛大力种子为外植体直接诱导丛生芽，繁育种苗的方法包括外植体灭菌、初代诱导、继代增殖、生根、移栽过程：（1）外植体灭菌过程取牛大力成熟黑色种子，用体积百分浓度为0.05％洗洁精溶液浸泡10min，再经流水冲洗15min，在超净工作台上用0.1％HgCl2溶液灭菌16min，然后用无菌水摇荡洗涤4次，再用无菌吸水纸将水分吸干后接种至初代诱导培养基；（2）初代诱导过程将步骤（1）灭菌好的种子接种至初代诱导培养基MS+3.0mg·L-16-BA+1.5mg·L-1KT+0.2mg·L-1NAA+500mg·L-1PVP上进行种子萌发及丛生芽诱导培养，此过程的培养时间<25d；所述培养基附加30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH6.0，配制分装后，于121℃灭菌20分钟，培养条件为26±2℃、光照强度2000Lx、光照时间10h/d；（3）继代增殖过程将步骤（2）初代诱导培养获得的丛生芽切下含2-3个芽的芽丛转接到继代培养基MS+2.0mg·L-16-BA+0.5mg·L-1KT+0.2mg·L-1TDZ+0.2mg·L-1NAA中进行增殖培养，周期为20-25d，增殖倍数为9.68/20d；所述培养基附加30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH6.0，配制分装后，于121℃灭菌20分钟，培养条件为26±2℃、光照强度2000Lx、光照时间10h/d；（4）生根过程当继代增殖芽苗长至2cm以上，从基部切成单个芽，转接到生根培养基1/2MS+2.5mg·L-1IBA+1.5mg·L-1IAA中诱导生根，培养7d开始长根原基，25d后得到瓶苗，可以开盖炼苗；所述培养基附加30g/L蔗糖和5g/L琼脂，pH6.0，配制分装后，于121℃灭菌20分钟，培养条件为26±2℃、光照强度2000Lx、光照时间10h/d；（5）移栽过程把步骤（4）生根的瓶苗搬到炼苗棚，打开瓶盖炼苗4d，然后用镊子将瓶苗取出，用清水洗去粘附在根部的培养基，移栽到细河沙上，移栽后10d内保持相对湿度95％左右，温度白天控制在23-25℃，夜间15-18℃，没有直射光的条件，移栽成活率84.07％，移栽15d后即可上杯种植，30d后可进行大田栽培。2CN103039361A说明书1/3页一种牛大力种子直接诱导丛生芽并快速繁育种苗的方法技术领域[0001]本发明属农业生物技术领域，具体是一种牛大力种子直接诱导丛生芽并快速繁育种苗的方法。背景技术[0002]牛大力为豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤（MillettiaspeciosaChamp.），又名大力薯、山莲藕，始载于《生草药性备要》，是《广西中药材标准》(1990年版)收载的地方药材。牛大力以根入药，味甘，平。归肺、肾经。具有补虚润肺、强筋活络的功效，临床证明其对腰肌劳损、风湿性关节炎、肺虚咳嗽、肺结核、慢性支气管炎、慢性肝炎等慢性疾病有较好的疗效。壮族民间常用于腰腿痛，发旺(风湿骨痛)，肺结核，慢性肝炎，慢性胃炎的治疗。[0003]现代研究发现，牛大力含有多糖、生物碱、香豆素和多种微量元素等成分，其中牛大力多糖是其主要活性成分，具有调节免疫系统、抗氧化、抗炎、抗肿瘤活性，尤其是抗肿瘤方面疗效明确，目前临床研究显示其对鼻咽癌、卵巢癌、肺癌、以及结肠癌具有良好的治疗效果。同时牛大力多糖也是理想的免疫增强剂；生物碱和香豆素具有保肝、祛痰、镇咳、镇痛、镇静、解痉的作用，且对正常细胞均没有毒副作用，在开发抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等药物方面有着特殊的优势，已成为提取企业竞相开发的新