一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN109691389A(43)申请公布日2019.04.30(21)申请号201910023442.0(22)申请日2019.01.10(71)申请人西南科技大学地址621010四川省绵阳市涪城区青龙大道中段59号(72)发明人唐志康王仁睿黄晶侯大斌余马曾明颖樊莉刘金焕陈梨(74)专利代理机构北京众合诚成知识产权代理有限公司11246代理人苗艳荣(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页附图1页(54)发明名称一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法(57)摘要本发明公开了一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法，包括以下步骤：将兰科植物的外植体进行表面消毒，获得组培苗；选取健壮的组培苗，去除外围根；去除主茎，保留根及假鳞茎；将假鳞茎横切，接种于诱导培养基上，光照培养；将不定芽转接至增殖培养基上，光照培养。本发明建立了一种通过假鳞茎诱导不定芽的兰科植物种苗新型快速繁殖方法，直接成苗，前期繁殖效率和传统的繁殖相比提高了3-8倍，结合增殖阶段，整体增殖效果可达9-48倍。CN109691389ACN109691389A权利要求书1/1页1.一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)以兰科植物的假鳞茎、花梗等器官为外植体，通过表面消毒后，将外植体转到初代培养基上进行光照培养。2)选取兰科植物组培苗，在超净工作台条件下去除外围根；3)去除主茎，保留主根及假鳞茎；4)将假鳞茎横切，接种于诱导培养基上，光照培养；5)将不定芽转接于增殖培养基上，光照培养。2.根据权利要求1所述的一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法，其特征在于，以兰科植物的假鳞茎、花梗等器官为外植体，洗衣粉水浸泡20min，自来水冲洗半小时，在超净工作台里，95％酒精浸泡外植体30s，无菌水清洗1次，0.1％升汞+1-2滴吐温灭菌8-15min，无菌水冲洗5次，初代培养基为MS+BA1.0-3.0mg/L+NAA0.1-1.0mg/L。3.根据权利要求1所述的一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法，其特征在于，所述的组培苗为6-10周苗龄的组培苗。4.根据权利要求1所述的一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法，其特征在于，步骤(3)中保留主根及以上1.0-1.5cm的假鳞茎。5.根据权利要求1所述的一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法，其特征在于，所述的诱导培养基为：MS+TDZ0.5-5.0mg/L+NAA0.1-2.0mg/L。6.根据权利要求1所述的一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法，其特征在于，所述的增殖培养基为：MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.2-1.0mg/L。7.根据权利要求1所述的一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法，其特征在于，步骤(1)、(4)和步骤(5)中光照培养条件为25±2C°。2CN109691389A说明书1/4页一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法技术领域[0001]本发明属于植物组织培养快速繁殖技术领域，具体地说，涉及一种诱导不定芽进行兰科植物种苗快速繁殖的方法。背景技术[0002]兰科植物是被子植物的第二大科，集药用、观赏价值于一体，具有极高的经济、生态和科研价值。兰科植物果实一般为蒴果，种子数量极多但细小，无胚乳，在自然环境下种子萌发率极低，即使萌发后若缺少必要的共生真菌等先天条件也很难萌发成苗。再加上人类活动、气候变暖等因素，大多数野生兰科植物生存状态不容乐观，对兰科植物加大保护力度具有十分迫切的现实意义。[0003]分株方式作为兰科植物常用的无性繁殖技术，繁殖系数低，生长需2-4年，生长周期较长，消耗量大，不能满足需求。组织培养技术效率高，能提供大量的种苗，这种方式已在兰科植物中进行广泛应用，为兰科植物开辟了新的繁殖技术。但兰科植物普遍存在生长较为缓慢的现象，一般从建立外植体到生根阶段耗时需1-2年。因此，提高繁殖效率对兰科植物的组织培养极为重要，增殖阶段在提高组培苗的繁殖效率方面起着关键的作用。现有关于增殖阶段的研究多集中于激素组合对兰科植物繁殖效果的影响，如张爱丽等(2018)比较了2,4-D、6BA、NAA、KT对不同增殖代数白及苗进行扩繁，结果表明，1、2代增殖苗适合以愈伤组织-丛生芽增殖，在MS+香蕉泥50g/L+2，4-D0.1mg/L+KT0.5mg/L培养基上进行培养，增殖系数可达8.32和7.68，3代增殖苗以分蘖繁殖为主、愈伤组织-丛生芽增殖为辅，在MS+香蕉泥50g/L+6BA0.1mg/L+NAA1.5mg/L培养基上培养，增殖系数为4.73，4代以后增殖苗以分蘖增殖为主、假鳞茎繁殖为辅