一种杉木愈伤组织培养方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号(10)授权公告号CNCN103229722103229722B(45)授权公告日2015.01.21(21)申请号201310195125.X究.《生命科学研究》.2002,第6卷(第4期),第351-352页.(22)申请日2013.05.23陈剑勇.杉木茎尖诱导愈伤组织及植株再生(73)专利权人广西壮族自治区林业科学研究院研究.《西南林学院学报》.2009,第29卷(第5地址530002广西壮族自治区南宁市邕武路期),第37-41页.23号审查员姜岚(72)发明人黄开勇陈琴郝海坤蓝肖戴俊唐庆兰张照远(74)专利代理机构广西南宁汇博专利代理有限公司45114代理人邹超贤(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)(56)对比文件CN102286424A,2011.12.21,全文.CN102369879A,2012.03.14,全文.CN103070074A,2013.05.01,全文.CN101027972A,2007.09.05,全文.林荣华.杉木高效再生与基因转化的初步研权权利要求书1页利要求书1页说明书4页说明书4页附图3页附图3页(54)发明名称一种杉木愈伤组织培养方法(57)摘要本发明公开了一种杉木愈伤组织培养方法，筛选出颗粒饱满，无病虫害的杉木种子作为外植体，通过无菌培养后获得无菌实生苗，剪取无菌实生小苗的叶片、茎段或根系，接种于诱导培养基中诱导愈伤组织发生，最后将诱导形成的愈伤组织转入增殖培养基中进行增殖。本发明简单易行，能够有效缩短愈伤组织诱导和增殖的时间，提高杉木愈伤组织诱导率，为杉木产业的发展提供大量颜色好、结构致密的优质愈伤组织材料，具有较好的经济效益。CN103229722BCN103297BCN103229722B权利要求书1/1页1.一种杉木愈伤组织培养方法，其特征在于：选取杉木种子作为外植体，培养出实生苗，诱导实生苗的愈伤组织发生后进行增殖，具体操作步骤如下：（1）无菌实生苗的获取：筛选出颗粒饱满，无病虫害的杉木种子作为外植体，通过无菌培养获得无菌实生苗；所述的无菌实生苗的培养方法是将杉木种子置于三角瓶内，加入浓度为1～5%的洗洁精溶液，采用纱布封住瓶口，置于摇床上振荡漂洗10～15min后，置于流水下冲洗1～2h，然后用无菌水清洗2～3次，将种子转到超净工作台上用0.15%升汞溶液灭菌9～12min，无菌水清洗8～10次后，将种子接种于1/2MS培养基上进行培养，获取无菌实生苗；（2）愈伤组织诱导：剪取苗龄为1～10天无菌实生苗的叶片、茎段或根系，接种于诱导培养基中诱导愈伤组织发生；所述的诱导培养基由：1/2MS+1.0～2.0mg/L2,4-D+0.5～1.5mg/LKT+100～150mg/L维生素C+0.75%琼脂+3.0%蔗糖组成；（3）愈伤组织增殖：取出步骤（2）中诱导形成的愈伤组织切成小块后转入增殖培养基中进行增殖；所述的增殖培养基由：1/2MS+1.0～2.0mg/LKT+0.5～1.5mg/LIBA+100～150mg/L维生素C+0.75%琼脂+3.0%蔗糖组成。2CN103229722B说明书1/4页一种杉木愈伤组织培养方法技术领域[0001]本发明涉及一种愈伤组织培养方法，尤其涉及一种杉木愈伤组织培养方法。背景技术[0002]植物愈伤组织培养是植物组织培养过程中的一个重要阶段，愈伤组织不仅可以诱导完整植株的形成，还可用于种质资源的保存，同时也是悬浮培养的细胞和原生质体的来源。杉木（Cunninghamialanceolata）为我国特有的针叶用材树种，其材质好，生长快，产量高，是我国南方的主要造林树种。杉木组织培养主要是通过腋芽诱导或愈伤组织诱导途径进行，而愈伤组织诱导是杉木组织培养过程中的一个重要环节，高诱导率和高质量的愈伤组织培养是后期愈伤组织分化的重要基础。我国杉木组织培养开始于20世纪50年代，现有技术中，采用腋芽诱导途径进行杉木组织培养快速繁殖的研究较多，而利用外植体诱导愈伤组织发生，再通过愈伤组织诱导不定芽发生进而获得杉木完整植株的研究相对较少。发明内容[0003]本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种简单易行，能够缩短愈伤组织诱导和增殖的时间，提高愈伤组织诱导率的杉木愈伤组织培养方法。[0004]本发明的目的是通过以下技术方案实现的：[0005]一种杉木愈伤组织培养方法，其特征在于：选取杉木种子作为外植体，培养出实生小苗，诱导实生苗的愈伤组织发生后进行增殖，具体操作步骤如下：[0006]（1）无菌实生苗的获取：筛选出颗粒饱满，无病虫害的杉木种子作为外植体，通过无菌培养获得无菌实生苗；[0007]（2）愈伤组织诱导：剪取苗龄为1～10天无菌实生苗的叶片、茎段或根系，接种