分离的多肽及其用途.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局*CN103289971A*(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103289971103289971A(43)申请公布日2013.09.11(21)申请号201310280306.2(22)申请日2013.07.05(83)生物保藏信息CCTCCNO：M20132432013.06.04(71)申请人常熟理工学院地址215500江苏省苏州市常熟市南三环路99号(72)发明人王立梅朱益波朱颖越唐红梅齐斌(74)专利代理机构江苏致邦律师事务所32230代理人徐蓓(51)Int.Cl.C12N9/10(2006.01)C12N15/54(2006.01)C12N15/70(2006.01)C12N1/21(2006.01)C12N1/20(2006.01)C12P7/40(2006.01)权利要求书1页权利要求书1页说明书8页说明书8页C12R1/225(2006.01)序列表7页序列表7页附图3页附图3页(54)发明名称分离的多肽及其用途(57)摘要本发明涉及一种分离的多肽、一种分离的寡核苷酸、一种表达载体、一种微生物、一种制备该微生物的方法、一种制备芳香族氨基酸转氨酶的方法以及一种制备苯丙酮酸的方法。该分离的多肽，其具有SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。该多肽具有芳香族氨基酸转氨酶的活性。CN103289971ACN1032897ACN103289971A权利要求书1/1页1.一种分离的多肽，其具有SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。2.一种分离的寡核苷酸，其包含编码权利要求1所述多肽的核酸序列或其互补序列。3.根据权利要求1所述的寡核苷酸，其为DNA，并且具有SEQIDNO：1所示的核酸序列或其互补序列。4.一种表达载体，其包含权利要求2或3所述的寡核苷酸。5.一种微生物，其特征在于，所述微生物表达权利要求1所述的多肽。6.根据权利要求5所述的微生物，其特征在于，所述微生物包含权利要求2或3所述的寡核苷酸。7.根据权利要求5所述的微生物，其分类命名为副干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei）M17，以保藏编号CCTCCNO：M2013243，保藏于中国典型培养物保藏中心。8.一种制备权利要求5~7任一项所述微生物的方法，其特征在于，包括：向宿主微生物中引入权利要求4所述的表达载体。9.一种制备芳香族氨基酸转氨酶的方法，其特征在于，包括：培养权利要求6~8任一项所述的微生物，以便获得包含芳香族氨基酸转氨酶的培养产物；以及从所述培养产物分离所述芳香族氨基酸转氨酶。10.一种制备苯丙酮酸的方法，其特征在于，包括：在存在权利要求1所述多肽或者权利要求6~8任一项所述的微生物的条件下，使苯丙氨酸与α-酮戊二酸接触，以便获得丙酮酸。2CN103289971A说明书1/8页分离的多肽及其用途技术领域[0001]本发明涉及生物技术领域，具体的，本发明涉及分离的多肽及其用途，更具体的，本发明涉及一种分离的多肽、一种分离的寡核苷酸、一种表达载体、一种微生物、一种制备该微生物的方法、一种制备芳香族氨基酸转氨酶的方法以及一种制备苯丙酮酸的方法。背景技术[0002]在大肠杆菌中天冬氨酸转氨酶和芳香族氨基酸转氨酶都能催化苯丙氨酸生成苯丙酮酸。在乳酸菌中也有报道芳香族氨基酸转氨酶催化苯丙氨酸的转氨作用。目前对于大肠杆菌天冬氨酸转氨酶的研究已有很多报道，而对芳香族氨基酸转氨酶的结构、活性中心和反应机制研究报道较少，特别是乳酸菌中的芳香族氨基酸转氨酶的研究还未见报道。发明内容[0003]本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。[0004]本发明是基于发明人的下列发现而完成的：发明人通过对出发菌株——乳酸杆菌（Lactobacillussp.）W2进行诱变处理，通过反复5～6次的诱变、初筛和复筛操作，选育到一株苯基乳酸产量高，突变后稳定性好的新菌株，将其命名为副干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei）M17，并且从该新菌株中分离了一种新型多肽，具有芳香族氨基酸转氨酶的活性。[0005]由此，在本发明的第一方面，本发明提出了一种分离的多肽，其具有SEQIDNO：2所示的氨基酸序列。发明人发现，该多肽具有芳香族氨基酸转氨酶的活性，并且在诸如副干酪乳杆菌（Lactobacillusparacasei）M17、大肠杆菌等微生物中表达时，其具有非常高的酶活性。[0006]在本发明的第二方面，本发明提出了一种分离的寡核苷酸，根据本发明的实施例，该寡核苷酸包含编码前面所述多肽的核酸序列或其互补序列。由此，利用该寡核苷酸，能够有效地编码前面所述的多肽，从而获得高活性的芳香族氨基酸转氨酶。根据本发明一些实施例，该寡核苷酸为DNA，并且具有SEQIDNO：1所示的核酸序列或