富集赭曲霉毒素A的免疫亲和吸附剂及其制备方法与应用.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号(10)申请公布号CNCN103480340103480340A(43)申请公布日2014.01.01(21)申请号201310411949.6G01N30/02(2006.01)(22)申请日2013.09.11G01N30/50(2006.01)(71)申请人广西壮族自治区粮油科学研究所地址530002广西壮族自治区南宁市南梧路316号(72)发明人周晓李川山谢军李炜韦素梅刘运龙谢体三萧浩徐德林林丰林丹超(74)专利代理机构北京纪凯知识产权代理有限公司11245代理人关畅任凤华(51)Int.Cl.B01J20/24(2006.01)B01J20/30(2006.01)权权利要求书1页利要求书1页说明书8页说明书8页附图1页附图1页(54)发明名称富集赭曲霉毒素A的免疫亲和吸附剂及其制备方法与应用(57)摘要本发明公开了富集赭曲霉毒素A的免疫亲和吸附剂及其制备方法与应用。该富集赭曲霉毒素A的免疫亲和吸附剂，是将赭曲霉毒素A多克隆抗体和含氨基的固相载体偶联得到的偶联物；所述赭曲霉毒素A多克隆抗体按照包括如下步骤的方法制备：以赭曲霉毒素A-NHS活性酯与载体蛋白的偶联物为免疫原免疫非人哺乳动物得到抗血清，从所述抗血清中纯化得到所述富集赭曲霉毒素A多克隆抗体。本发明富集赭曲霉毒素A的免疫亲和吸附剂及其亲和色谱柱具有浓缩待测样品中赭曲霉毒素A浓度，提高检测下限、排除杂质干扰、提高检测准确性和可靠性、减少样品过柱时间达到快速检测的作用。CN103480340ACN10348ACN103480340A权利要求书1/1页1.制备富集赭曲霉毒素A的免疫亲和吸附剂的方法，包括将赭曲霉毒素A多克隆抗体和含氨基的固相载体偶联得到富集赭曲霉毒素A的免疫亲和吸附剂的步骤；所述赭曲霉毒素A多克隆抗体按照包括如下步骤的方法制备：以赭曲霉毒素A-NHS活性酯与载体蛋白的偶联物为免疫原免疫非人哺乳动物得到抗血清，从所述抗血清中纯化得到所述富集赭曲霉毒素A多克隆抗体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述赭曲霉毒素A-NHS活性酯是赭曲霉毒素A通过N,N-二环己基碳化二亚胺与N-羟基琥珀酰亚胺形成的活性酯。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述赭曲霉毒素A-NHS活性酯按照包括如下步骤的方法制备：1）将碘乙酸、N-羟基琥珀酰亚胺和N,N-二环己基碳化二亚胺在黑暗中进行缩合反应，得到NHS-碘乙酰活性酯；2）将所述NHS-碘乙酰活性酯与赭曲霉毒素A进行取代反应，得到赭曲霉毒素A-NHS活性酯。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述1）为将碘乙酸、N-羟基琥珀酰亚胺和N,N-二环己基碳化二亚胺以269:695:582的摩尔比，在四氢呋喃中，20℃-25℃在黑暗中进行缩合反应，反应完毕后，以10000g离心，取上清液得到NHS-碘乙酰活性酯；所述2）为将赭曲霉毒素A的四氢呋喃溶液与所述上清液混匀，在20-25℃进行取代反应，得到所述赭曲霉毒素A-NHS活性酯。5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：从所述抗血清中纯化得到所述富集赭曲霉毒素A多克隆抗体的方法包括：将所述赭曲霉毒素A-NHS活性酯与所述含氨基的固相载体偶联得到的偶联物作为纯化所述赭曲霉毒素A多克隆抗的亲和层析介质，从所述抗血清中通过亲和层析纯化得到所述赭曲霉毒素A多克隆抗体；和/或所述亲和层析中用体积百分浓度为3%的乙酸水溶液洗脱所述赭曲霉毒素A多克隆抗体。6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：所述含氨基的固相载体为含氨基的琼脂糖凝胶或为含氨基的葡聚糖凝胶；和/或，所述载体蛋白为血兰蛋白或牛血清白蛋白。7.由权利要求1-6中任一所述的方法制备的富集赭曲霉毒素A的免疫亲和吸附剂。8.以权利要求7所述的免疫亲和吸附剂为填料的富集赭曲霉毒素A的免疫亲和色谱柱。9.含有权利要求7所述的免疫亲和吸附剂或权利要求8所述的免疫亲和色谱柱的富集赭曲霉毒素A的试剂盒。10.权利要求7所述的免疫亲和吸附剂，权利要求8所述的免疫亲和色谱柱、或权利要求9所述的试剂盒在富集赭曲霉毒素A中的应用。2CN103480340A说明书1/8页富集赭曲霉毒素A的免疫亲和吸附剂及其制备方法与应用技术领域[0001]本发明涉及富集赭曲霉毒素A的免疫亲和吸附剂及其制备方法与应用。背景技术[0002]赭曲霉毒素是赭曲霉及青霉菌中某些产毒菌株侵染粮食、食品、饲料及其他农副产品后所产生的有毒代谢产物。赭曲霉毒素A是赭曲霉毒素中毒性最强、产量最高的一种，对人和动物有强烈的毒害作用，可以导致动物的肾萎缩、胎儿畸形、流产、死亡，并且具有高度的致癌性。赭曲霉毒素A在大麦、小麦、燕麦、玉米等大多数谷物中存在。用受赭曲霉毒素A污染的谷物饲