一种金花茶种苗繁育方法.pdf

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号CN104642111A(43)申请公布日2015.05.27(21)申请号201510065537.0(22)申请日2015.02.09(71)申请人广西壮族自治区农业科学院花卉研究所地址530007广西壮族自治区南宁市西乡塘区大学东路174号(72)发明人黄昌艳周主贵卜朝阳卢家仕何荆洲闫海霞王晓国(74)专利代理机构北京中誉威圣知识产权代理有限公司11279代理人王正茂(51)Int.Cl.A01H4/00(2006.01)权利要求书1页说明书4页(54)发明名称一种金花茶种苗繁育方法(57)摘要本发明公开了一种金花茶种苗繁育方法，所述方法包括以下步骤：果实预处理、果实灭菌处理、萌发诱导、初始继代、继代增殖、壮苗、炼苗、瓶外生根和综合管理。本方法具有快速获得大量无菌苗、操作简单、污染率低和萌发率高的优点。CN104642111ACN104642111A权利要求书1/1页1.一种金花茶种苗繁育方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)果实预处理：选取尚未开裂，绿色，饱满，无病虫害的果实，用毛刷刷干净果实表面的杂质，然后用饱和洗衣粉水浸泡15-20min，流动清水冲洗20-30min；(2)果实灭菌处理：在超净工作台上，用75％酒精浸泡15-20min，无菌水洗3-4次，然后用解剖刀剖开果实，取出种子，放入0.1％升汞中浸泡5-10min，无菌水洗4-5次，最后在接种盘中，切开种皮，取出胚乳，接入诱导培养基中，将有胚芽的一端置于培养基底部，操作过程中不得伤及种子胚芽部分；(3)萌发诱导：将胚乳接入诱导培养基中10-15d后，胚芽开始伸长生长，60d后萌发率达85-100％，胚芽可长至4-5cm；(4)初始继代：将胚乳及胚芽取出，切掉顶芽以及部分胚乳，剩余部分接入继代培养基中60d后，从胚芽基部长出大量的丛生芽，增殖倍数达6-8倍；(5)继代增殖：将丛生芽切成小块接入继代增殖培养基中60d后，单芽变壮，且长出更多小芽，增殖倍数达5-7倍；(6)壮苗：将丛生芽取出，把高于1.5cm的小芽切出，接入壮苗培养基中50d后，单芽伸长生长成无根健壮小苗，低于1.5cm的小丛芽继续接入继代增殖培养基中；(7)炼苗：将小苗放置于炼苗室进行炼苗20d后，即可移栽，进行瓶外生根；(8)瓶外生根：移栽前2天，打开瓶盖，让小苗适应外部空气湿度。然后取出小苗，洗去培养基，将小苗的基部置于750mg/L的IBA溶液中浸泡10-15min，然后种在黄泥：泥炭＝1:1的基质中；(9)综合管理：调试自动喷淋系统，于8：00-18：00期间每间隔1h喷水1次，每次喷淋30-60s，根据不同季节进行调整，夏季喷淋时间长，冬季喷淋时间短。2.根据权利要求1所述金花茶种苗繁育方法，其特征在于：步骤(2)和(3)中所述诱导培养基为MS+GA30.5-1.0mg/L。3.根据权利要求1所述金花茶种苗繁育方法，其特征在于：步骤(4)中所述继代培养基为WPM+6-BA2.0-4.0mg/L。4.根据权利要求1所述金花茶种苗繁育方法，其特征在于：步骤(5)中所述继代增殖培养基为WPM+6-BA1.0-3.0mg/L。5.根据权利要求1所述金花茶种苗繁育方法，其特征在于：步骤(6)中所述壮苗培养基为MS+6-BA1.0-3.0mg/L+NAA0.05-0.1mg/L。6.根据权利要求1所述金花茶种苗繁育方法，其特征在于：步骤(7)中所述炼苗室的温度为25(±7)℃，光照强度为5000lx。2CN104642111A说明书1/4页一种金花茶种苗繁育方法技术领域[0001]本发明属于植物组织培养技术领域，特别是涉及一种金花茶的种苗繁育方法。背景技术[0002]金花茶组培快繁技术发展至今，有关金花茶离体培养的研究报道较少，研究主要集中于利用成年植株茎段为外植体诱导成苗，如郑若仙(1980)、廖汉刃(1987)、颜幕勤(1988)、林莉(2005)。然而，利用茎段作为外植体仍存在诸多问题，如茎段灭菌很难彻底，极易发霉；木本植物茎段极易褐变，通过延长流水冲洗时间、提高消毒液浓度和延长灭菌时间进行处理可以一定程度上缓解褐变，但效果并不理想；另一方面腋芽诱导难度大，不易掌握。金花茶生长缓慢，枝条比较珍贵，过度剪取枝条会影响母株的开花，利用茎段作为外植体，枝条消耗大，获得的无菌苗较少，且人力消耗大。[0003]另外，有报道利用种子、子胚、叶片等作为外植体的研究，但此研究仅局限于诱导愈伤组织，且没有全面系统的报道愈伤组织分化成苗的研究。因此对于金花茶组培快繁技术的研究应当在保证诱导成活率的基础上尽可能的节省外植体材料，继而形成一套全面、高效、实用性强的金花茶组培快繁技术体系。发明内容[0004]本发明的目的是提供一种快速、